山东数据库外泌体服务

    Microenvironment-inducedPTENlossbyexosomalmicroRNAprimesbrainmetastasisoutgrowth。思路：4.那么找到了PTEN是星形胶质细胞外泌体中的miR-19a沉默掉的，那么PTEN沉默了之后，**细胞后续发生了什么变化促进了转移灶形成呢？作者用多西环素处理**细胞，要么丢失PTEN,要么出现红色荧光蛋白，发现红色圈圈内的细胞因子CCL2表达差异，接着就抓住这点差异进行研究。**终证明了星形胶质细胞分泌的外泌体，将miRNA转运到原来PTEN正常的**细胞，使PTEN丢失，接着促进**细胞分泌CCL2，招募IBA1+骨髓细胞，促进**细胞扩增，减少凋亡，促进**转移灶形成。联想：**细胞在miRNA调控下，沉默抑*基因促进转移，那么其他**转移到一些脏器是否也存在类似的，增加miRNA沉默抑*基因或是减少miRNA****基因的促进转移呢？。 外泌体的各种系列应用领域还是不一样的。山东数据库外泌体服务

细胞上清（需采用去除外泌体的培养基）：

(1) 细胞在正常含有血清的培养基中培养一定时间，贴壁细胞密度在70 %-80 %，悬浮细胞密度在60 %-70 %；

(2) 对于贴壁细胞，去除原有培养基，换为新的不含外泌体的培养基或者无血清培养基；对于悬浮细胞，300 g，4°C，10 min收集细胞；

(3) 使用不含外泌体的培养基或者无血清培养基悬浮细胞并继续培养。细胞继续培养24-48 小时，根据细胞的生长速度确定收取上清时间；

(4) 收集细胞上清，300 g，4°C，离心10 min；小心吸取上清，注意避免吸入细胞或者细胞碎片；

(5)   3000 g，4°C，再次离心15 min，确保将细胞或者细胞碎片去除干净；

(6) 取上清，注意避免吸入细胞或者细胞碎片，合并相同的细胞培养液上清样品，装入无菌的玻璃瓶，可在4°C短期保存（1-2天），长期保存可冻存于-80°C 。建议细胞上清分离后尽快进行外泌体分离，保存在4°C和-80°C，都会对产量有一定的影响。

1、样本采集：

1）.采集方式：不同的方式（手动或电刺激）收集的乳汁会影响其脂肪的含量，皮肤对样本的污染程度也不同。

2). 采集部位：乳房的前后部产生的乳汁成分有一定差异，一般采集相同体积后混合，或者从全乳收集。

3). 样本保存：低温保存。不可冰冻或常温、高温保存。不同的保存容器（玻璃、聚乙烯、聚丙烯等）会通过影响细胞含量而影响外泌体的含量。

2、注意事项

要注意选择对照组，因为有很多因素可以影响乳汁中外泌体的成分，其中包括泌乳阶段、乳汁产量、婴儿哺乳、饮食、代谢状态、生理与心理状态等。例如初乳（1-5天）、过渡乳（6-15天）和成熟乳中蛋白质、脂肪、维生素和抗体的浓度相差很大。

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体液样本收集外泌体，脑脊液。

脑脊液中的外泌体含量虽然较其他体液如血液少，但可作为神经系统疾病的潜在生物标志物。脑脊液相对较为稳定，但仍需注意以下方面：

1、CSF采集时避免CSF受血液污染

2、对照标本的获取

由于健康对照脑脊液获取困难，往往以其他神经异常的患者为对照。需要注意对外泌体的影响。

目前关于外泌体等胞外囊泡的收集，还缺少标准化的样本采集参考标准，需要在实验中不断摸索完善，各位勤劳的童鞋，多多努力，说不定你的方法，会成了标准化的蓝本哟。

外泌体的好处您了解吗？山东数据库外泌体服务

    目前，外泌体研究主要集中在以下几个方向：开发疾病诊断和预后标志物揭示疾病发病机制作为药物载体，实现靶向给药作为疾病***的靶点参与免疫反应调控。外泌体蛋白质组学服务：云生物根据主流外泌体研究策略，开发了一套完整的外泌体蛋白质组学研究技术服务体系。提供从外泌体收集、鉴定到蛋白质组定性定量、数据分析一系列的技术服务项目，确保外泌体研究在同样技术标准下获得高质量研究数据。外泌体收集：对于外泌体研究，分离和收**格的外泌体是非常关键的一步。目前对于外泌体收集有：超速离心、密度梯度离心、超滤、磁珠免疫、聚合物沉淀与试剂盒提取法等几种主要方法，各种方法均存在不同优缺点。云生物在现有试剂盒法的基础上进行大量技术优化，形成了一套针对不同样品的外泌体提取试剂盒和配套收集方法。可以在提高外泌体收集丰度的同时，***减少杂蛋白残留，以保证蛋白质组分析阶段获得的数据更加稳定和可靠。 山东数据库外泌体服务