尿液可通过无创的方式收集并且含有泌尿系统发生疾病时(包括**)产生的外泌体,其性质稳定且RNA含量高于尿液中的细胞内的RNA。
1、尿液的收集:
1).尽量选择受试者的“新鲜”尿液,并注意避免细菌污染。受试者的亲属(性别相同、年龄相仿)可作为对照。
2).注意对饮食的控制。
乳汁,乳汁是一种非常复杂的混合物,其中含有蛋白质、脂质、细胞以及其他重要的物质。人类的乳汁中含有许多非营养性生物活性物质,例如母体细胞、抗体、化学介质、维生素和酶。近来已有研究表明乳汁中含有外泌体。 云生物的外泌体服务拥有完善的售后服务。江苏测序外泌体报价
体液样本收集外泌体。1、选择血清还是血浆?推荐大多数研究选择血浆。血液凝固过程中血小板会产生大量外泌体,含量占血清中外泌体的50%以上,选择血浆可避免不必要的影响。2、注意抗凝剂的选择肝素类抗凝剂与PCR假阴性有关,这可能是因为肝素与引物和/或酶有竞争作用。除了***PCR,肝素可以与外泌体结合,阻止细胞摄取外泌体。因此需要记录肝素类药物治疗的患者的血液样本。EDTA和双嘧达莫(CTAD),CTAD可以阻止血小板的***并***其释放外泌体。EDTA可能会干扰PCR反应(尽管其程度小于肝素),但是还是优于其他选择。此外,有研究表明钙螯合剂可在体外促进外泌体与血小板的结合从而降低经EDTA、或柠檬酸盐处理后的血液样本中外泌体的表观数量。使用肝素时这种影响就不会发生,因此建议在测量外泌体的精确数量时选用肝素。但是也有研究表明肝素可以导致体外条件下外泌体的减少。总之,目前尚需要更多的研究论证抗凝剂是否及如何对外泌体的释放,作用和下游反应产生特异性影响。 天津粒径外泌体服务云生物抽提的外泌体质量很好。
胸水:
(1) 临床收集胸水后若不能**时间处理,请于4℃临时保存(不得超过8 h);
(2) 将收集到的胸水1000 g离心10 min,收集上清液;
(3) 将得到的胸水上清3000 g离心10 min,收集上清;
(4) -80℃冰箱中保存。
腹水:
(1) 临床收集腹水后若不能**时间处理,请于4℃临时保存(不得超过8 h);
(2) 将采集到的腹水在4℃下(室温亦可)离心2000 g,20 min,去除腹水中的残渣;
(3) -80℃冰箱中保存。
胆汁:(1) 用无菌容器收集胆汁;
(2) 将收集到的胆汁在4℃下,3000 g离心10 min去除细胞沉渣和碎片;
(3) 收集胆汁上清液,4℃或者-20℃长期保存。
转移的**细胞为适应新环境,沉默了自己的基因,促进**转移灶形成,而沉默基因的正是外泌体中的microRNA。文章概要为:“Microenvironment-induced PTEN loss by exosomal microRNA primes brain metastasis outgrowth”,由外泌体分泌的microRNA引起微环境介导的PTEN丢失,为脑转移生长做了准备。这篇是2015.10.19发表在Nature 上的文章,文章主要讲的是,脑环境依赖的PTEN可回复性表达,受脑内的星形胶质细胞分泌的外泌体中的microRNA调控。您知道云生物的外泌体系列都有哪些吗?
鉴定方式不外乎就是下面这三种:1.形态学(电镜);2.粒子大小(径粒分析);以及3.标志蛋白(WB)。综合来说,透射电镜可以清楚的看到外泌体的大小、形态等,属于鉴定方法中的金标准,其他两种方式则常常作为辅助使用。得到了外泌体之后如何做?外泌体携带大量功能性的miRNA,少量的mRNA、lncRNA,以及特异性的蛋白质(如细胞因子、生长因子)等生物活性物质,在体内参与细胞通讯、细胞迁移、促血管新生和抗**免疫等生理过程,与多种疾病的发生和进程密切相关。对外泌体验明正身之后,就可以在蛋白水平和核酸水平对其进行检测和深入分析了。由于外泌体中含有较多降解的短RN**段,测序时会成为背景干扰有效数据,通常都建议使用芯片的方法检测外泌体miRNA。而对于lncRNA来说,大部分在细胞内低表达,在外泌体中丰度就更低了,对于低丰度基因,芯片检测的准确性远远大于测序,因此也建议使用基因芯片的方法检测外泌体lncRNA。云生物主营产品包括外泌体。四川鉴定外泌体报价
尿液的外泌体怎么制备?江苏测序外泌体报价
基于目前的研究,miRNA分拣如外泌体有四条可能的途径,虽然深层的机制还远不够清楚。一、中性鞘磷脂酶-2(nSMase2)依赖性途径。nSMase2是***个被报道与miRNA进入外泌体有关的分子。Kosakaetal.发现nSMase2的过表达能增加外泌体miRNA的数量,相反地,***nSMase2表达减少外泌体miRNA数量。二、miRNA模体和苏素化核不均一核糖**白(hnRNPs)依赖性途径。Villarroya-Beltrietal.发现苏素化的hnRNPA2B1能识别miRNA序列上的3’端部分,引起特异性的miRNA被装入外泌体。类似的是,其他两种hnRNP家族蛋白,hnRNPA1和hnRNPC,也能与外泌体miRNA结合,提示它们也可能是miRNA分拣机制中的一员。然而,结合的模体还未明确。三、miRNA序列3’末端依赖性途径。Koppers-Lalicetal.发现尿苷化的内源性miRNA的3’末端主要存在于来自B细胞或尿液的外泌体中,而腺苷化的内源性miRNA的3’末端主要存在于B细胞中。以上两种选择模式共同提示了miRNA序列3’末端含有一个关键的分拣信号。四、miRNA诱导的沉默复合体(miRISC)相关途径。 江苏测序外泌体报价