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    在一项发表于Nanoscale杂志的研究中，研究者提出了一种基于新型巯基（NovelThiol-Based）的胞外囊泡荧光标记方法，采用共聚焦显微镜等方法观察在*细胞源性外泌体在***细胞中的动态变化。制备荧光标记外泌体的步骤如下：1.取200μg/ml的C5-马来酰亚-Alexa488（绿色荧光）或C5-马来酰亚-Alexa633（红色荧光）µl，加入提取好的含60-100µg蛋白质的30ul外泌体样品中，以PBS补足至50ul，不搅拌的情况下于暗室中室温孵育60分钟。2.在孵育时将exosomespincolumns（Invitrogen）试剂盒按照说明书准备好并将粉末树脂于室温下水合15-30分钟。3.将装有柱子的收集管于离心机水平转子中以750xg离心2分钟，弃收集管，向树脂中加入荧光染料孵育后的外泌体4.将柱子置于xg离心3分钟，多余的染料会被树脂吸附5.荧光标记后的外泌体缓慢加入1000ul不含酚红的DMEM，于μm过滤膜过滤后。分装并储存于负80度备用。以这种方法制备的外泌体在HELA细胞中，随着时间延长，带有绿色荧光（EV488）的外泌体逐渐密集于细胞核周围，可以明显观察到外泌体的动态变化过程。云生物专业致力于外泌体分离。广东WB外泌体报价

体液样本收集外泌体，脑脊液。

脑脊液中的外泌体含量虽然较其他体液如血液少，但可作为神经系统疾病的潜在生物标志物。脑脊液相对较为稳定，但仍需注意以下方面：

1、CSF采集时避免CSF受血液污染

2、对照标本的获取

由于健康对照脑脊液获取困难，往往以其他神经异常的患者为对照。需要注意对外泌体的影响。

目前关于外泌体等胞外囊泡的收集，还缺少标准化的样本采集参考标准，需要在实验中不断摸索完善，各位勤劳的童鞋，多多努力，说不定你的方法，会成了标准化的蓝本哟。

    样本准备注意事项：●采集的样本需要符合纳入标准：如年龄、肥胖（身高、体重）、血糖血脂血压、诊断情况等。●统一早晨空腹**，尽量避免样本间的差异影响。●如个别样本发生溶血，则弃掉。●样本编号用油性笔清楚地写在管壁及管盖上。●离心管在放入冰箱前，用封口膜密封。●如果提供的是冻存细胞株，需提供详尽的复苏方法。●细胞培养基必须使用去除exosome（de-exosome）的血清或者无血清培养基（例如ThermoFisher的SFM）。●分离外泌体前的样品不能加入任何RNA保护剂（如Trizol）。●分离好的外泌体如需进行电镜观察，需要放4°C保存，并且不宜保存太久。●全血建议使用PAXgene管保存，不可冻融，取血后尽早制备血浆或血清，血浆或血清可以-80°C保存，但应避免反复冻融。●储存条件以及储存时间影响外泌体得率，保存在-80℃冰箱中的样本，如果储存时间过长，外泌体产量也会***降低。●干冰运输应采用壁厚且质量完好的泡沫箱，24小时到达的，干冰数量不得低于5公斤；48小时到达的，干冰数量不得低于8公斤；夏季适当增加干冰（倍）。

**多组学研究：与中山大学附属***医院研究团队合作，在难以获得复发转移肝*组织样本的前提下，根据现有文献进行算法还原、建模及数据库挖掘，获取公共数据库中已有肝*样本（尤其是复发转移）RNA-seq、单细胞测序和部分蛋白组学数据，重新进行分析，几乎是零基础进行；协助其构建了相对完善的组学分析体系，并寻找到多个与复发转移相关的靶点，同时构建了新的临床预测模型。**科研基金：检测服务及数据分析助力取得2020年国自然面上十项、青年基金十八项。尿液抽提外泌体需要提供多少量？

    Microenvironment-inducedPTENlossbyexosomalmicroRNAprimesbrainmetastasisoutgrowth。思路：2.那么到底是脑微环境中的哪种细胞，哪种物质介导，致使PTEN丢失呢？作者想想脑内的**细胞周围无非是：星形胶质细胞，**相关成纤维细胞(CAF)，正常成纤维细胞，就把这些细胞分别与**细胞共培养，发现只有与星形胶质细胞共培养后，PTEN的表达明显下降。接着作者就把星形胶质细胞给干扰掉，把星形胶质细胞内特异性靶向PTEN丢失的microRNA干掉，发现脑转移的**细胞内的PTEN没有丢失，瘤体也变小了。得出第二个结论：星形胶质细胞来源的miR-19a沉默了**细胞中的PTEN。 外泌体抽提的周期需要多久？北京电镜外泌体哪家好

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(1) 采集前/中后段晨尿，应该尽量选择受试者的“新鲜”尿液100ml，并注意避免细菌污染，收集前注意对饮食的控制，于4℃临时保存（不得超过8 h）；

(2) 并于3000×g离心15min，去除细胞或细胞碎片；

(3)   -80℃冰箱中保存。

脑脊液：

(1) 收集脑脊液10ml，采集方式为腰椎穿刺，样本一经分离，请务必立即置于冰上或4℃短暂保存（不得超过4 h）,避免受到血液污染,勿使用含肝素抗凝剂的采样管收集盛放；

(2) 并于3000×g 离心15min，去除细胞或细胞碎片；

(3)   -80℃冰箱中保存。