浙江WB外泌体服务

    外泌体（Exosome）是活细胞分泌的来源于晚期核内体(也称为多囊泡体)的直径30-150nm的纳米级脂质包裹体结构，密度，内部包裹了蛋白质、mRNA和microRNA等物质。包括**细胞在内的几乎所有类型的细胞，都可以产生并释放外泌体。外泌体由细胞分泌释放出来，在血液等体液内传播，***又可被其他细胞吞噬，是细胞间通讯的重要介质。外泌体天然存在于体液中，包括血液、唾液、尿液和母乳等，而不同组织来源的外泌体在内容物组成和功能方面存在差异，同时这种差异受到细胞外基质和微环境的动态调控。越来越多的证据表明，宿主细胞或**细胞分泌的外泌体参与了**发生、生长、侵袭和转移。对外泌体的分析和检测可以辅助疾病的早期诊断、疗效评价和预后分析。 云生物有专业做外泌体抽提和服务的团队。浙江WB外泌体服务

⊙外泌体的膜同细胞一样，是磷脂双分子层

⊙外泌体膜含有MHC-1/2蛋白，能绑定特异性的肽链

⊙外泌体膜中有跨膜蛋白PGRL、LAMP1、LAMP2

⊙外泌体膜中有膜转运融合蛋白annexins、RAN、GTPases

⊙外泌体膜上有脂质筏Chol、ceramide、SM、PC，限制膜流动，参与包括跨膜信号转导、物质内吞、脂质及蛋白定向分选的多种功能

⊙外泌体中含有核酸，包括miRNA、DNA、lncRNA、mRNA；同时还有一些蛋白、脂类也能被包裹到外泌体中

⊙与外泌体产生相关的重要分子：Ral、ARF6、PLD2、RAB家族

⊙一些物质进行外泌体中是特异性的：如hnRNPA2B1能结合lncRNA或miRNA特异性的序列（GGAG/CCCU），进行主动包埋 浙江WB外泌体服务做外泌体就找云生物！

    体液样本收集外泌体。抽血技巧：操作要轻柔迅速。试管可翻转8-10次使样本与抗凝剂混匀，避免剧烈摇晃。混匀后，将试管固定垂直放置于离心分离器，在顶部记录抽血的准确时间，因为抽血与离心之间的时间间隔可能是一个影响因素。外泌体在抽血后30分钟内是比较稳定的，若时间过长将导致外泌体数量增加。血小板极易因抽血时的物理因素而***并释放出外泌体，其中包括接触、压力、切力。抽血时间：除了血液黏度，体内血液的各项指标在***中变化很大。生理节律会对血小板的***产生很大的影响。白细胞的募集和循环系统中促炎细胞和***细胞会随时间变化。大量的具有特殊表面分子的微粒也被证明会随时间变化。目前尚无设计较好的实验对证实不同时间血液中外泌体的变化，故应在相同的时间采集样本。目前饮食是否会对EV产生影响尚未可知，但是由于脂蛋白可运载RNA且食物的摄取可以影响循环脂蛋白颗粒的类型、数量和作用，故抽血可在***一次用餐后一段确定的时间进行。

    体液样本收集外泌体。1、选择血清还是血浆？推荐大多数研究选择血浆。血液凝固过程中血小板会产生大量外泌体，含量占血清中外泌体的50%以上，选择血浆可避免不必要的影响。2、注意抗凝剂的选择肝素类抗凝剂与PCR假阴性有关，这可能是因为肝素与引物和/或酶有竞争作用。除了***PCR，肝素可以与外泌体结合，阻止细胞摄取外泌体。因此需要记录肝素类药物治疗的患者的血液样本。EDTA和双嘧达莫（CTAD），CTAD可以阻止血小板的***并***其释放外泌体。EDTA可能会干扰PCR反应（尽管其程度小于肝素），但是还是优于其他选择。此外，有研究表明钙螯合剂可在体外促进外泌体与血小板的结合从而降低经EDTA、或柠檬酸盐处理后的血液样本中外泌体的表观数量。使用肝素时这种影响就不会发生，因此建议在测量外泌体的精确数量时选用肝素。但是也有研究表明肝素可以导致体外条件下外泌体的减少。总之，目前尚需要更多的研究论证抗凝剂是否及如何对外泌体的释放，作用和下游反应产生特异性影响。 您知道云生物的外泌体系列都有哪些吗？

    在一项发表于Nanoscale杂志的研究中，研究者提出了一种基于新型巯基（NovelThiol-Based）的胞外囊泡荧光标记方法，采用共聚焦显微镜等方法观察在*细胞源性外泌体在***细胞中的动态变化。制备荧光标记外泌体的步骤如下：1.取200μg/ml的C5-马来酰亚-Alexa488（绿色荧光）或C5-马来酰亚-Alexa633（红色荧光）µl，加入提取好的含60-100µg蛋白质的30ul外泌体样品中，以PBS补足至50ul，不搅拌的情况下于暗室中室温孵育60分钟。2.在孵育时将exosomespincolumns（Invitrogen）试剂盒按照说明书准备好并将粉末树脂于室温下水合15-30分钟。3.将装有柱子的收集管于离心机水平转子中以750xg离心2分钟，弃收集管，向树脂中加入荧光染料孵育后的外泌体4.将柱子置于xg离心3分钟，多余的染料会被树脂吸附5.荧光标记后的外泌体缓慢加入1000ul不含酚红的DMEM，于μm过滤膜过滤后。分装并储存于负80度备用。以这种方法制备的外泌体在HELA细胞中，随着时间延长，带有绿色荧光（EV488）的外泌体逐渐密集于细胞核周围，可以明显观察到外泌体的动态变化过程。外泌体的多种系列总有一款是您满意。浙江WB外泌体服务

云生物抽提的外泌体可进行粒径检测。浙江WB外泌体服务

与上海交通大学医学院附属新华医院临床科室深度合作（新华医院为国内儿科领域排名**医院），将2018年发表于cell上的干性指数算法进行***还原，并通过大规模公共数据库挖掘与分析，成功应用到小儿髓母细胞瘤分子亚型病理分析与药物筛选领域，并发表于老牌**学杂志Molecular

Oncology( 2020 IF=6.574)，同时获得杂志社编审一致好评，如临床样本丰富，进入10分档次无问题；后续深度合作，我们将相关算法进行了系列开发，在多种**的分子亚型鉴别方面获得成功，目前已有多篇文章再投或修稿，影响因子在2-7分之间。 浙江WB外泌体服务