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免疫组化基本参数
  • 品牌
  • 融享
  • 公司名称
  • 上海融享生物科技有限公司
  • 行业类型
  • 生物行业
  • 安全质量检测类型
  • 可靠性检测
  • 服务内容
  • 免疫组化
  • 所在地
  • 上海
  • 检测类型
  • 行业检测
  • 服务分类
  • HE染色
免疫组化企业商机

根据标记物的不同,免疫细胞化学技术可分为免疫荧光细胞化学技术,免疫酶细胞化学技术,免疫铁蛋白技术,免疫金-银细胞化学技术,亲和免疫细胞化学技术,免疫电子显微镜技术等。近些年来,核酸分子原位杂交技术采用生物素、地高辛等非放射性物质标记探针,和免疫细胞化学技术密切结合,发展为杂交免疫细胞化学技术。不同的免疫细胞化学技术,各具有独特的试剂和方法,但其基本技术方法是相似的,都包括抗休的制备,组织材料的处理、免疫染色、对照试验、显微镜观察等步骤。还有双重和多重标记技术也有重要的用途。病理实验 免疫荧光,HE染色服务实验找融享生物。吉林特殊染色免疫组化实验公司

分类

1)按标记物质的种类,如荧光染料、放射性同位素、酶(主要有辣根过氧化物酶和碱性磷酸酶)、铁蛋白、胶体金等,可分为免疫荧光法、放射免疫法、免疫酶标法和免疫金银法等。

2)按染色步骤可分为直接法(又称一步法)和间接法(二步、三步或多步法)。与直接法相比,间接法的灵敏度提高了许多。

3)按结合方式可分为抗原-抗体结合,如过氧化物酶-抗过氧化物酶(***)法;亲和连接,如卵白素-生物素-过氧化物酶复合物(ABC)法、链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结(SP)法等,其中SP法是比较常用的方法;聚合物链接,如即用型二步法,此方法尤其适合于内源性生物素含量高的组织抗原检测。


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酶消化法 常用的消化酶有胰蛋白酶、胃蛋白酶,应严格掌握好消化时间、温度和浓度。胰蛋白酶使用浓度为0.05%~0.1%,消化温度为37℃,消化时间为10~40**要用于细胞内抗原的显示:胃蛋白酶使用浓度为0.4%,消化温度为37℃,消化时间为30~180要用于细胞间质抗原的显示,如:Laminin(层粘蛋白),Collagen IV(IV型胶原蛋白)等。热修复法 现常用微波修复、高温高压修复、水浴加热修复法。较常用的修复法是pH6.0枸橼酸缓冲液。修复过程中的注意要点是:(1)达到规定的温度(92℃~95℃以上);(2)维持一定的时间,微波修复、水浴加热须控制在10~15min,高温高压修复须控制在2min左右;(3)避免切片干涸,如果切片干涸,抗原则可能完全丢失;(4)加热后必须经过室温自然冷却20~30min,使未折叠的蛋白分子链恢复天然构型。

拍照

有条件的话比较好立即拍照,若不能及时拍照,也要封好片和用指甲油封固,保持避光和湿度。使用荧光显微镜注意严格按照荧光显微镜出厂说明书要求进行操作,不要随意改变程序;应在暗室中进行检查;防止紫外线对眼睛的损害,在调整光源时应戴上防护眼镜;检查时间每次以1~2h为宜,超过90min,超高压汞灯发光强度逐渐下降,荧光减弱;标本受紫外线照射3~5min后,荧光也明显减弱或褪色;激发光长时间的照射,会发生荧光的衰减和淬灭现象;所以较多不得超过2~3h;荧光显微镜光源寿命有限,标本应集中检查,以节省时间,保护光源。天热时,应加电扇散热降温,新换灯泡应从开始就记录使用时间。灯熄灭后欲再启用时,须待灯光充分冷却后才能点燃。天中应避免数次点燃光源。关闭汞灯至少在开启15-30分钟后;标本染色后立即观察,因时间久了荧光会逐渐减弱。若将标本放在聚乙烯塑料袋中4℃保存,可延缓荧光减弱时间,防止封裱剂蒸发;使用的玻片等载体,都必须厚度均匀,无明显的自发荧光,如果使用油镜,还必须保证镜油为无荧光镜油;电源比较好装稳压器,否则电压不稳不只会降低汞灯的寿命,也会影响镜检的效果。


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意义编辑

近年来,随着免疫组织化学技术的发展和各种特异性抗体的出现,使许多疑难得到了明确诊断。在常规病理诊断中,5%-10%的病例单靠H.E.染色难以作出明确的形态学诊断。尤其是免疫组化在诊断和鉴别诊断中的实用价值受到了普遍的认可,其在低分化或未分化的鉴别诊断时,准确率可达50%-75%。免疫组织化学的临床应用主要包括以下几方面:

⑴恶性的诊断与鉴别诊断;

⑵确定转移性恶性的原发部位;

⑶对某类进行进一步的病理分型;

⑷软组织的一般需根据正确的组织学分类,因其种类多、组织形态相像,有时难以区分其组织来源,应用多种标志进行免疫组化研究对软组织的诊断是不可缺少的;

⑸发现微小转移灶,有助于临床方案的确定,包括手术范围的确定。

⑹为临床提供方案的选择。



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