非特异性染色弥散性均匀）2．组织切片制作过程的影响①固定不良—非特异性染色，显示不均。②边缘干燥—非特异性染色（常见），加抗体时勿干片。3．人工假象与特异性结果显示不在同一平面上。阳性对照：用已知抗原阳性的切片与待检标本同时进行免疫细胞化学染色。对照切片呈阳性结果，标为阳性对照。阴性对照：用确证不含已知抗原的标本作对照，应呈阴性结果，称阴性对照。其实这只是阴性对照中的一种，阴性对照还应包括空白、替代、吸收和***实验。▲染色失败的几种原因：（1）所染的全部切片均为阴性结果，包括阳性对照在内。全部（－）原因可能：①染色未完全严格按照操作步骤进行；②漏加一种抗体，或抗体失效；③缓冲液内含叠氮化钠，***了酶的活性；④底物中所加H2O2量少或失效；⑤复染或脱水剂使用不当（2）所有切片均呈阳性反应，原因可能是：①切片在染色过程中抗体过浓，或干燥了。②缓冲液配置中未加氯化钠和PH值不准确，洗涤不彻底。③使用已变色的呈色底物溶液，或呈色反应时间过长。④抗体温育的时间过长。⑤H2O2浓度过高，呈色速度过快。粘附剂太厚。（3）所有切片背景过深，原因可能是：①未加酶消化处理切片。②切片或涂片过厚。③漂洗不够。融享生物免疫组化已经多年。同时，生物在线为您提供众其他企业技术服务。安徽组织免疫组化机构电话
经验总结编辑
做过病理实验的人都知道，实验看似容易，但真想把它做好，还是需要花上很长一段时间去积累和摸索经验。我从事病理实验已有6年多了，在这段时间里，我做过许许多多病理相关实验，刚开始啥也不懂，一味按照网上操作流程来做，但做的结果往往并不是十分理想，较好终结果未能达到预期的效果。经过一段时间的浏览和学习，从一些在论坛内学习、请教，并结合实践操作，我经历了初级——查找资料和摸索方法；中级——问题求助和不断总结；高级——难题解答和经验分享这三个阶段，也学到了不少知识，积累了很多宝贵经验，与大家一起分享下。
关于掉片
HE、Masson、番红O、Nissl、Mallory等染色方法很少有掉片现象；免疫组化和细胞凋亡检测我们采用专门购买的防脱片，由于整个实验流程比较长，在实验过程中产生掉片是很正常的现象。对于容易掉片的组织，如：骨组织、脑组织、皮肤组织等掉片有时候是不可避免的。
辽宁荧光免疫组化技术免疫组化病理实验融享生物的优势：高效率，性价比高，为病理实验提供有效保障。
（1）ABC复合物的制备：（2）ABC法反应原理6．SP或SAP法（过氧化物酶标记的链霉卵白素或过氧化物酶标记的碱性磷酸酶染色）Streptavidin/peroxidaseorstrepta-vidin/alkalinephosphatase）※该法是ABC法基础上的进一步改良，使卵白素与链霉（而非生物素）结合，而后再结合PO。它有4个亚基可与生物素结合，灵敏特异，背景低，成本低。现在还有plus盒。优点是：更简便，放大倍数↑，等电点中性更适合组织。分子量小，穿透力↑。7．蛋白A—金法（Protein—Agoldmethod）~多用于电镜8．双重组化染色法应用双重免疫组织化学可在同一张切片，同一细胞或亚细胞结构内同时显示两种不同的抗原。9．免疫金—银染色法（Immunogold—silverstainingIGSS）固定——见前述注意事项：1．固定剂的选择：因组织而不同，注意质量和性能。2．固定方式的选择：①浸渍固定（参考文献）②灌注固定（+后固定）③蒸汽固定免疫组化染色步骤（以ABC法为例）1．切片脱蜡入水，入PBS洗三次/15分钟。2．封闭内源性过氧化物酶。用新配置的（在PAS或—HCL缓冲液）室温，30分钟。3．水洗，入PBS，洗三次，每次5分钟。4．减少非特异性着色用稀释20倍的正常血清（产生二次抗体动物血清！），室温，30分钟。
实验为例
从我接触的很多本科生和研究生中发现，他们的确是免疫组化“新手”，他们只注重如何做和较好终的结果，但对为什么这样做不太感兴趣。他们常按照网上所说的方法，摸索好的抗体浓度和条件后做出很漂亮的染色结果后，他们就认为自己已经掌握了免疫组化方法了，结果不求上进，更换一种新抗体后或实验出现异常结果后就很难做出来了。当然，免疫组化对于我来说，做过很多，但也不能说什么都会，只不过我做的多了，失败多了和思考多了，可能比新手多了解一些其中的诀窍，拿来与大家进行分享。此外，我个人经验不可能面面俱到，还需要更多有经验的高手一起分享、纠正和补充。在这里。
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织材料的处理
组织材料的处理是获得良好免疫组织化学结果的前提，必需保证要检测的细胞或组织取材新鲜，固定及时，形态保存完好，抗原物质的抗原性不丢失、不扩散和被破坏（下节 详述）。
三、免疫染色
可在细胞涂片或组织切片上进行免疫染色。一般程序是：①标记抗体与标本中抗原反应结合；②用PBS洗去未结合的成分；③直接观察结果（免疫荧光直接法）；或显色后再用显微镜观察（免疫酶直接法）。在此基础上发展出间接法，多层法，双标记法等各种方法，将在本书各有关章 节 内详述。
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