技术优势
1、ChIP-Seq 能实现真正的全基因组分析。目前所能获得的芯片上固定的探针只能**全基因组部分序列,所获得的杂交信息具有偏向性。
2、对于结合位点分析,ChIP-Seq 通过寻找“峰”,结合分辨率可精确到10~30 bp,而芯片上探针由于长度所限,无法精确定位,即使目前比较高水平的商业芯片都无法提供可与ChIP-Seq 媲美的分辨率。
3、是所需样本数量。ChIP-chip 需要多达4~5 μg?的起始样本,在杂交之前需要进行LM-PCR,但可能导致背景增高,竞争性扩增等导致假阳性。而ChIP-Seq *需要纳克级起始材料,如SOLiD 起始材料可低至20ng。 云生物提供甲基化服务。山东cfDNA甲基化技术服务口碑推荐
DNA甲基化是在DNA甲基化转移酶(Dnmt)的作用下将甲基选择性地添加到胞嘧啶上形成5-胞嘧啶的过程,刚被发现时被定义为第五种碱基,实际上它是一种重要的表观遗传学标记,在调控基因表达、维持染色质结构、基因印记、X染色体失活以及胚胎发育等生物学过程中发挥着重大的作用,它就像魔术师手中一顶**神奇的“帽子”,带给世人层出不穷的惊喜。DNA甲基化的发生、保持和去除都处在生物体精细的调控中,一旦发生紊乱,对于动物而言将导致胚胎死亡或者**等重大疾病,对于植物而言将会出现各种的表型缺陷,那么这顶神奇的“帽子”是如何发挥它神奇功用的呢?这个问题成为整个生物界**热的研究焦点之一。研究者们从DNA甲基化的发生机制,保持机制到去甲基化机制,从基因组甲基化状况研究到特异位点甲基化状况研究,从**初CpG位点的研究到non-CpG位点的研究,从高甲基化研究到低甲基化、未甲基化研究,以及与其密切相关的羟甲基化也慢慢进入人们的视野,***多角度解析DNA甲基化。在Nature、Science、Cell等**杂志上经常能看到它熟悉的身影,说它是生物学研究的“宠儿”一点都不为过。正所谓“工欲善其事,必先利其器”。 江苏WGBS技术服务口碑推荐ATAC-seq实验过程短,从实验到分析可达2周。
cfDNABS-Seq送样要求一、送样类型分离好的血浆二、保存方式分离后的血浆,用ml离心管分装,例如:1ml/管;放-20℃冰箱中保存(短暂保存,1-2周);放-80℃冰箱中长期保存(1年以内);保存期间不能冻融。三、运输条件干冰运输:顺丰陆运(3-4天时间),夏季10-15公斤干冰;秋冬季10公斤干冰四、抽血要求1、使用Streck**管(不建议使用普通的EDTA-钠抗凝管),采集10ml外周静脉血(客户没有Streck**管,公司配送);2、室温或者放置4℃冰箱中半小时以上,不超过8小时,进行血浆分离步骤五、血浆分离步骤1、4℃条件下以1600g离心10min,离心后将上清(血浆)分装到2、4℃条件下以16000g离心10min去除残余细胞,将上清移入新的离心管中,每管分装1ml;3、血浆样本存放于-80℃冰箱中保存;使用干冰运输,提取之前不能冻融。备注1:血浆分离在4℃条件进行,如果客户没有冷冻离心机,也可以在室温条件下进行;备注2:离心后取血浆上清,避免吸取白细胞;通常10ml全血可以获得4-5ml血浆。
DNA甲基化(DNAmethylation)是指在DNA甲基化转移酶(DNMT)催化下,以S-腺苷甲硫氨酸为甲基供体,将活性甲基转移至DNA链中特定碱基上的化学修饰过程。哺乳动物基因组中,DNA甲基化多发生在CpG二核苷酸中的胞嘧啶的5位碳原子。DNA甲基化是一种表观(epigenetic)修饰,它在不改变DNA序列的情况下,对个体的生长、发育、基因表达模式以及基因组的稳定性起到重要的调控作用,这种修饰是可逆的,并且这种修饰在发育和细胞增殖的过程中是可以稳定传递的。近年来的大量研究表明,DNA异常甲基化与**的发生、发展、细胞*变有着密切的联系。DNA甲基化在**中的作用主要表现在以下几个方面:一是甲基化的CpG岛二核苷酸中的胞嘧啶以较高的频率脱氨基变成胸腺嘧啶,造成碱基突变;二是抑*基因和DNA修复基因由于超甲基化而沉默;三是*基因甲基化水平降低而活化;四是基因组总体甲基化水平降低使转座子、重复序列活化导致染色体稳定性下降。这些因素是导致**发展、转移、恶化**终导致患者死亡的重要原因。其中后三个方面源于甲基化水平的改变,而甲基化的过程是可逆的,因此可以甲基化位点为靶点,靶向用药进行**的预防、***。 芯片平台作为目前比较成熟的筛选工具。
RIP-seqRNAImmunoprecipitation是研究细胞内蛋白与RNA相互作用的技术,是了解转录后调控网络动态过程的有力工具,能更有效地发现miRNA的调节靶点。这种技术运用针对目标蛋白的抗体把相应的RNA-蛋白复合物沉淀下来,然后经过分离纯化就可以对结合在复合物上的RNA进行测序分析。RIP可以看成是普遍使用的染色质免疫沉淀RIP技术的类似应用,但由于研究对象是RNA-蛋白复合物而不是DNA-蛋白复合物,因此RIP实验的优化条件与ChIP实验并不相同。RIP实验下游结合二代测序技术称为RIP-seq,通过高通量测序和分析,深度解析与目标蛋白相互结合的RNA的区域或种类和相互作用强弱。应用领域1.高效获取蛋白所结合的RNA,在全转录组范围得到与蛋白有相互作用的RNA,包括mRNA、lncRNA、circRNA、microRNA。2.准确获取蛋白结合RNA的特征,通过RNA结合区域的富集得到蛋白结合的RNA位置。3.通过motif分析获取蛋白结合序列的偏好性。技术优势***的确定蛋白质在细胞自然状态下与RNA结合的研究手段,可以有效的鉴定一个蛋白是否是RNA结合蛋白以及RNA结合蛋白与哪些RNA直接作用,并确定其结合位点。,得知相互作用RNA的类型。,可通过分析可得知与蛋白作用的RNA序列。 细胞、全血、组织样本干冰运输。上海单细胞测序技术服务怎么样
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芯片平台作为目前比较成熟的筛选工具,已经在很多领域有了相应的应用。多家芯片公司在DNA甲基化这块儿有了相应的产品提供,其中应用**为***的就Agilent平台和Illumina平台,相应的产品包括AgilentHumanCpGIslandMicroarrayKit,InfiniumHumanMethylation27BeadChip和InfiniumHumanMethylation450KBeadChip。另外RocheNimbleGen和Affymetrix也有相应的芯片推出,但是NimbleGen的芯片今年下半年已经停产。不同的芯片平台,各自的实验过程也是不一样的。安捷伦前期采用的甲基化DNA免疫共沉淀(MeDIP)技术。将基因组DNA分成两份,一份用来做MeDIP,另一份作为对照。两个样品都标记荧光(富集的样品用Cy5标记,对照用Cy3标记),然后与芯片杂交。芯片上每个探针的Cy5/Cy3强度比例显示出该区域的甲基化程度。 山东cfDNA甲基化技术服务口碑推荐