在细菌的系统分类学研究中有用的和常 用的分子钟是 rRNA, 其种类少、含量大(约占细菌 RNA 含量的 80%), 分子大小适中, 存在于所有的 生物中, 特别是其进化具有良好的时钟性质, 在结 构与功能上具有高度的保守性, 素有“细菌化石” 之称。rRNA 是细菌和真核细胞核糖体的基本组 成部分, 编码 rRNA 的基因是按 5′- 16S- 23S- 5S- 3′方式排列的, 由两个非编码的间隔区序列所分 开。16S rDNA、23S rDNA、5S rDNA 三部分组成 一个 RNA 操纵子, 这个操纵子作为一个单位进 行转录。转录后处理成为成熟的 16S、23S 和 5S rRNA。上海融享生物科技有限公司主营测序很多，其中16s 18S ITS 销很好。山东环境微生物16S测序
对 ＰＣＲ 产
物进行限制性片段长度多态性分析（ＲＦＬＰ），即使用特异的限
制性核酸内切酶作用在扩增的核糖体不同序列位置产生不同
长度的片段，经过凝胶电泳后将大小不同的片段分开，所检测
细菌 ＤＮＡ 碱基组成不同，电泳图谱 亦 不 同。通过观察酶切电
泳图谱、数值分析，便可分析样品中微生物组成或不同微生物
的种属关系。王蓉美等［８］利用１６ＳｒＲＮＡ 对１４种临床常见病
原菌同时进行 ＰＣＲ扩增，并根据扩增片段内变异区特点分别
选择限制性内切酶 ＨａｅⅢ、ＭｎⅡ、ＡｌｕⅠ、ＤｄｅⅠ和 ＢｓｔＢⅠ酶 切
后电泳，建立了各细菌菌株特有的酶切图谱，达到了对临床常
见病原菌种属进行快速鉴定的目的。 河南全长16S测序哪家好18S 多种测序供您选择。
１６Ｓ～２３ＳｒＲＮＡ 基因间区序列分析的基本方法 通 用
引物的选取是 ＰＣＲ扩 增１６Ｓ～２３ＳｒＲＮＡ 基因间区鉴定细菌
的关键所在，在１６ＳｒＲＮＡ 上 至 少 有４个 保 守 区 域，区 域２存
在于真细 菌、古 细 菌 和 真 核 生 物 中，被认为是保守序列。
Ｇｕｒｔｌｅｒ等对１８个属２１个种的２３ＳｒＲＮＡ 的前５２０个碱基
进行研究后发现５个保守区域，其中区域１０保守，适合作
通用 引 物 设 计。因此从理论上而言，１６ＳｒＲＮＡ 的 区 域 ２ 和
２３ＳｒＲＮＡ 的区域１０是扩增１６Ｓ～２３ＳｒＲＮＡ 区间的理想引物
设计部位。对于 ＰＣＲ扩增后的产物，Ｇｏｎｚａｌｅｚ等总结的主
要方法有依赖序列长度大小的电泳分离技术、特异序列杂交技
术、实时定量 ＰＣＲ技术、ＲＦＬＰ、ＤＮＡ 序列测定技术、焦磷酸测
序技术、单链构象多态性分析技术（ＳＳＣＰ）、质 谱 技 术（ＭＳ）和
高压液相色谱技术（ＨＰＬＣ）
DNA 探针杂交：PCR 扩增含有高变区的部分 16S rRNA 基 因, 然后用根据 16S rRNA 基因中高变区的序列 设计出一系列的种特异性的探针与之杂交。通过 16S rRNA 种属特异性的探针与 PCR 产物杂交以 获得微生物组成信息。此外, 探针也可以直接与样 品进行原位杂交检测, 通过原位杂交不仅可以测 定微生物的形态特征和丰度, 而且能够分析它们 的空间分布, 该方法简单快速, 主要应用于快速检 测, 但可能出现假阳性或假阴性结果。近年来 T Yamamoto 等设计和合成出人肠道 区系中常见的双歧杆菌属 5 个种( 两歧双歧杆菌、 青春双歧杆菌、婴儿双歧杆菌、短双歧杆菌和长双 歧杆菌) 的特异性的寡核苷酸探针, 它们具有 16~ 19 个碱基长度, 并与这 5 个种的 16S rRNA 序列 互补。用天然高分子量的 RNA 制备物作为靶子, 这些寡核苷酸探针对于人肠道中这些种的菌株具 有高度的种特异性, 结果表明用此法检测这 5 个 种的 16S rRNA 序列能取得所期望的结果, 并且 整个试验过程从获得纯细胞物后只需 6h 可完成。上海融享生物科技有限公司测序的16s很好。
ｒＲＮＡ 鉴定微生物具有高灵敏度和特异性，且
所需检测时间短，不依赖于微生物的分离培养，所以可用于临
床上快速、准确鉴定致病微生物，并且可以检测出未知的新型
微生物种类。１６ＳｒＲＮＡ 由于高度保守及变异性较小，适 合 于
属内种间的鉴别，而１６Ｓ～２３ＳｒＲＮＡ 区间由于具有高度变异
性及相对保守性，更适合那些１６ＳｒＲＮＡ 无法鉴别而关系非常
密切的某些菌种和种内菌株的鉴别，因此，这两种检测方法各
有所长，后者是前者的很好补充。但是在实验室检测过程中仍
旧存在某些问题，但相信随着分子生物学技术的进一步发展以
及对１６ＳｒＲＮＡ 及１６Ｓ～２３ＳｒＲＮＡ 区间基础和临床研究的不
断深入，许多目前在实验操作中存在的问题一定会得到更好的
解决。 上海融享生物科技有限公司测序的16s 18S ITS 上乘。重庆古细菌16S测序实验
16s 的主要特点有很多。山东环境微生物16S测序
１６ＳｒＲＮＡ 基因序列分析的基本方法通过１６ＳｒＲＮＡ 种属特异性的探针与 ＰＣＲ 产 物 杂 交 以 获
得微生物组成信息，或利用基因芯片将 ＤＮＡ 片段制作成探针
固定在支持物上，与 荧 光 标 记 的 待 检 ＤＮＡ 片 段 杂 交，通 过 观
察荧光信号的位置，即可确定待检细菌的种类。杨祖钦等，根
据引起化脓性脑膜炎的常见致病菌，成 功 地 建 立 了 ＤＮＡ 芯 片，可对该疾病快速、准确的诊断，明确病原菌。
对扩增产物进行变性
梯度凝胶电泳、温度梯度凝胶电泳（ＴＧＧＥ）分 析，直 接 观 察 其
多样性。Ｇｏｌｄｅｎｂｅｒｇ等［１１］还在此基础上建立了变性高效
液相色谱（ＤＨＰＬＣ）技术，并成功的分析了大便中菌群的组成，
监测药物治疗前后肠道菌群的动态变化。
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