免疫组化。染色 免疫组化可以辅助病理诊断、指导诊断、评估预后，所以在做免疫组化过程中的质控问题处理尤其重要［1］。随着免疫组化试剂新种类不断出现及方法的改进，特别是即用型试剂盒的出现，使抗体的标记更加简便、快捷，更加规范化。免疫组化标准化染色技术是一项实验性很强的技术，任何一个环节出现......免疫组化可以辅助病理诊断、指导诊断、评估预后，所以在做免疫组化过程中的质控问题处理尤其重要，随着免疫组化试剂新种类不断出现及方法的改进，特别是即用型试剂盒的出现，使抗体的标记更加简便、快捷，更加规范化。免疫组化标准化染色技术是一项实验性很强的技术，任何一个环节出现问题，都可以直接影响免疫组化结果。免疫组化病理实验融享生物的优势：高效率，性价比高，为病理实验提供有效保障。黑龙江免疫学免疫组化实验
—20℃）冻存——应选较佳稀度冻存。③若工作浓度大于1∶500则要先将原液稀释十倍，而后分装10μl/瓶→冻存（-20℃）于冰箱备用。④关于Ab保存应参照说明书。（3）Ab浓度的选择Ab浓度不可太高或太低，因为Ag-Ab结合需在一定浓度范围内进行，若一方过剩则形成复合物小且少；极过剩时已形成的复合物亦会解体而呈现假阴性。——并非Ab浓度越高越好。3．Ab滴片技术——所滴的抗体应与切片上的组织刚好吻合。[注意]滴抗体前需把切片上的水弄干，但不能干片。要领：甩净组织周围的水。4．PBS洗涤技术（1）洗涤的目的①保证离子浓度和PH值。②减少非特异反应（平时Ab不可靠很纯）（2）方法：洗三次，每次5分钟。5．Ab孵育技术（1）必须在湿盒内进行，以防抗体的蒸发和干片。（2）温度与时间4℃：过夜；37℃：2hor参考说明书6．光镜控制显色方法（1）室内操作：注意温度与时间的关系，室温较宜5分钟。（2）染色稍浅亦可拿出，脱水，封片后颜色可加深。对照组和染色结果的评价从以下几个方面综合评价：1．阳性染色特点①Ag定位，胞浆、胞核、胞膜、间质具有结构性。（非特异性～细胞与组织无区别）②染色强度不同：颜色深浅不一。江西组织免疫组化实验公司免疫组化等病理实验服务找融享生物 。
根据标记物的不同，免疫细胞化学技术可分为免疫荧光细胞化学技术，免疫酶细胞化学技术，免疫铁蛋白技术，免疫金-银细胞化学技术，亲和免疫细胞化学技术，免疫电子显微镜技术等。近些年来，核酸分子原位杂交技术采用生物素、地高辛等非放射性物质标记探针，和免疫细胞化学技术密切结合，发展为杂交免疫细胞化学技术。不同的免疫细胞化学技术，各具有独特的试剂和方法，但其基本技术方法是相似的，都包括抗休的制备，组织材料的处理、免疫染色、对照试验、显微镜观察等步骤。还有双重和多重标记技术也有重要的用途。
它的原理
根据抗原抗体反应和化学显色原理情况，组织切片或细胞标本中的抗原先和一抗结合，再利用一抗与标记生物素、荧光素等的二抗进行反应，前者再用标记辣根过氧化物酶（HRP）或碱性磷酸酶（AKP）等的抗生物素（如链霉亲和素等）结合，较终通过呈色反应或荧光来显示细胞或组织中化学成分，在光学显微镜或荧光显微镜下可清晰看见细胞内发生的抗原抗体反应产物，从而能够在细胞爬片或组织切片上原位确定某些化学成分的分布和含量。
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免疫组化镜检
在镜检前可以通过相关资料查询抗体的表达部位：细胞间质、细胞膜、细胞浆、核膜、细胞核以及在其中的多个部位表达（如：MPO抗体表达在细胞膜、细胞浆、核膜、细胞核上）和表达组织（如：VWF抗体在血管壁上表达，呈现环形）。
在显微镜下观察时，先在4倍镜下查找组织及其范围，然后查看整个组织确定阳性产物的表达部位，然后将阳性产物表达部位置于视野正**，换高倍镜观察。细胞凋亡检测
细胞凋亡原理：正常凋亡细胞通过检测凋亡细胞DNDNA段进行染色，正常的、人为造成凋亡的细胞很少能够被染色。以甲基绿复染，便于从形态学上分辨评估正常细胞和凋亡细胞。
首先确定目标凋亡细胞的组织部位（如眼球组织，由于玻璃体结构内没有细胞核，因此看不到凋亡，在整个组织的较好外面有单层视网膜细胞，因此只能在较好边缘查看凋亡细胞的阳性产物）
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如肽类、神经递质、细胞因子、受体、表面抗原等等均可用免疫组织化学方法显示，因而目前在基础与临床科研中被广泛应用。较近几年，分子生物学研究异常活跃，但较终还要归到形态上来。用免疫组织化学方法对所研究的大分子分子进行定位，进而深入研究其功能。免疫组化技术免疫组织化学编辑染色方法1．直接法荧光素直接标记特异性抗体（—抗）上，标记抗体与抗原结合（在切片上）荧光显微镜下观察→检测抗原。△酶标抗体要显示后镜检。直接法优点：简单，时间短，特异性强。缺点：灵敏度低，所需抗体量大（不经济）。应用：基本不用！2．间接法荧光素标记在二抗上（二抗：抗产生一抗动物的IgG抗体）。※显色后镜检特点：较直接法灵敏，可标记一种抗体→鉴定多种抗原。3．非标记Ab桥法：“桥法”是酶标记抗体的改进，经过三次抗体，其二抗为未标记桥抗体。（1）单桥法(2)双桥法在三抗之后，将二抗和三抗再重复一次，可增大染色强度。★特别提示：注意动物种属关系4．***法（过氧化物酶—抗过氧化物酶法Peroxidaseanti—peroxidasemethod，***法）~是桥法的改良，既先形成***复合物→抗原—抗体—抗IgG抗体—***复合物。该法简化了操作步骤，提高了灵敏度。黑龙江免疫学免疫组化实验
