物质所具有的抗原性主要由分布在抗原表面的抗原决定簇决定。固定液的固定对免疫组化的正确结果极其重要，此液能使抗原保存良好。抗原修复的好坏直接影响着免疫组化检测结果的可靠性。在进行免疫组化时并非所有的抗原都要进行抗原修复，抗原性保存良好或基本保存者不需要修复。目前抗原修复的方法主要有蛋白酶消化法、硼氢化钠（NaBH4）修复法和热修复法。较常用的是热修复法，尤其是细胞核抗原经热修复后，其染色效果特别好。热修复包括单纯加热、高压加热和微波加热3种,其原理是以热效应来引导抗原决定基重新暴露。热修复法影响抗原修复的关键因素有两个：一是温度,至少要达到100 ℃,时间3～15 min;二是修复液的pH值为7.5～8.5。所以我们必须清楚影响抗原的因素及各种抗原修复的方法，严格按照抗体说明书进行抗原修复。鉴于抗原修复的方法较多，在实际工作中，究竟选用何种抗原修复，应根据抗体种类予以选择，必要时可以多种方法同时使用，这样使其更具有针对性，标记结果更理想。组化染色结果有很大影响。免疫组化找上海融享生物科技有限公司。江苏免疫组化实验服务
阴性染色产生的原因有:
⑴一抗和二抗浓度不合适或孵育条件不妥。
⑵荧光素提前衰退。荧光素质量不佳或操作过程中没有注意避光等防止荧光素衰退的事项。
⑶血清封闭时间过长。
⑷抗体稀释液PH值不合适，影响抗原抗体反应。
⑸组织切片不平、裂片或脱片很严重，易引起大块阴性着色。
⑹组织标本不新鲜或已经冷冻组织制成的切片中抗原易弥散，易引起本来表达的部位阴性染色或弱着色。
⑺荧光显微镜不会使用，激发波长选择错误。
免疫组化，是应用免疫学基本原理--抗原抗体反应，即抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂(荧光素、酶、金属离子、同位素)显色来确定组织细胞内抗原(多肽和蛋白质)，对其进行定位、定性及相对定量的研究，称为免疫组织化学技术(immunohistochemistry)或免疫细胞化学技术(immunocytochemistry)。 江苏免疫组化实验服务高通量转录组测序找融享生物。
复染
目的是形成细胞轮廓，从而更好地对目标蛋白进行定位，经常用苏木素复染（胞核染料）。注意苏木素复染时间要看当时的室温、溶液的新旧、目标抗原的定位等情况，一般数秒-数分钟，胞浆蛋白可以适当时间长一点，而胞核算白则要短。不过这个如果染色不理想可以补救的。方法是：染色深则分化时间稍长些即可；染色浅则再置于苏木素中染色即可。盐酸酒精是分化，氨水是返兰。作用不同。片子复染完后流水振洗，然后置于盐酸酒精中数秒（一定动作要快）后拿出流水振洗，在放入氨水中返兰即可。
非特异性染色弥散性均匀）2．组织切片制作过程的影响①固定不良—非特异性染色，显示不均。②边缘干燥—非特异性染色（常见），加抗体时勿干片。3．人工假象与特异性结果显示不在同一平面上。阳性对照：用已知抗原阳性的切片与待检标本同时进行免疫细胞化学染色。对照切片呈阳性结果，标为阳性对照。阴性对照：用确证不含已知抗原的标本作对照，应呈阴性结果，称阴性对照。其实这只是阴性对照中的一种，阴性对照还应包括空白、替代、吸收和***实验。▲染色失败的几种原因：（1）所染的全部切片均为阴性结果，包括阳性对照在内。全部（－）原因可能：①染色未完全严格按照操作步骤进行；②漏加一种抗体，或抗体失效；③缓冲液内含叠氮化钠，***了酶的活性；④底物中所加H2O2量少或失效；⑤复染或脱水剂使用不当（2）所有切片均呈阳性反应，原因可能是：①切片在染色过程中抗体过浓，或干燥了。②缓冲液配置中未加氯化钠和PH值不准确，洗涤不彻底。③使用已变色的呈色底物溶液，或呈色反应时间过长。④抗体温育的时间过长。⑤H2O2浓度过高，呈色速度过快。粘附剂太厚。（3）所有切片背景过深，原因可能是：①未加酶消化处理切片。②切片或涂片过厚。③漂洗不够。融享生物公司提供免疫组化，低价格，高服务，提供售后服务。
经验总结编辑
做过病理实验的人都知道，实验看似容易，但真想把它做好，还是需要花上很长一段时间去积累和摸索经验。我从事病理实验已有6年多了，在这段时间里，我做过许许多多病理相关实验，刚开始啥也不懂，一味按照网上操作流程来做，但做的结果往往并不是十分理想，较好终结果未能达到预期的效果。经过一段时间的浏览和学习，从一些在论坛内学习、请教，并结合实践操作，我经历了初级——查找资料和摸索方法；中级——问题求助和不断总结；高级——难题解答和经验分享这三个阶段，也学到了不少知识，积累了很多宝贵经验，与大家一起分享下。
关于掉片
HE、Masson、番红O、Nissl、Mallory等染色方法很少有掉片现象；免疫组化和细胞凋亡检测我们采用专门购买的防脱片，由于整个实验流程比较长，在实验过程中产生掉片是很正常的现象。对于容易掉片的组织，如：骨组织、脑组织、皮肤组织等掉片有时候是不可避免的。
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临床资料 31例乳腺患者均为女性，年龄26～62岁，中位年龄49岁。病程5天～18个月。其中浸润性导管23例，浸润性小叶*6例，粘液2例。肿块比较大径1.4～6.5cm。
2.2 组织芯片质量 自行设计和制做的组织芯片能够满足观察研究的要求，但由于为手工所制，组织芯排列不够整齐，且0.5mm直径组织芯在HE染色和免疫组化染色过程中易发生位置滑动，并有少量脱片。
2.3 组织学检查 乳腺浸润性导管细胞异型性较显现，胞质丰富，红染、淡红染或透明，核大，核仁明显，核分裂像易见，成不规则条索、巢状、片状排列，可见腺样结构。浸润性小叶**细胞较小，相互间粘附性差，稍松散，常呈单排列样浸润于胶原纤维束间，围绕正常导管呈同心圆状排列，部分病例见小巢状、腺泡状结构。粘液腺*见小簇细胞成腺状、小巢状散在漂浮于粘液湖中。
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