细胞分泌到细胞外环境中分别称为外泌体和微泡的细胞外膜泡是内源性和质膜起源的不同类型的膜囊泡。这些细胞外囊泡(EVs)表示了细胞间通讯的一个重要模式,作为膜和细胞溶质蛋白、脂质和RNA细胞之间传递的载体。然而,我们对于EV形成的分子机制知识的缺乏以及缺乏干扰货物包装或囊泡释放的方法仍然妨碍了其在体内生理相关性的探索。这篇综述专注于EV的特性和目前提出的形成、定位和功能的机制。该综述描述了将外泌体定义为特定的分泌囊泡群体的物理性质,总结了其生物学效应,特别是免疫系统,讨论了分泌囊泡可能作为细胞间信使的潜在作用。活内的外泌体动态(哪个外泌体迁移至何处)也会成为今后需要努力研究的重要课题。黑龙江组织外泌体染色
从细胞培养物中富集的总外泌体(使用“总外泌体分离”试剂或超速离心)可以通过免疫磁珠捕获进一步纯化特定的亚群。使用基于Dynabeads的CD9、CD63、CD81或EpCam特异性试剂,或将链霉亲和素试剂与您选择的生物素化抗体结合,以基于表面抗原,纯化所有群体。外泌体是指包含了复杂 RNA 和蛋白质的小膜泡 (30-150nm),现今,其特指直径在40-100nm的盘状囊泡。1983年,外泌体初次于绵羊网织红细胞中被发现, 1987年Johnstone将其命名为“exosome”。多种细胞在正常及病理状态下均可分泌外泌体。其主要来源于细胞内溶酶体微粒内陷形成的多囊泡体,经多囊泡体外膜与细胞膜融合后释放到胞外基质中 。河南血清外泌体染色PKH67/PKH26外泌体是内源性和质膜起源的不同类型的膜囊泡。
膜封闭的囊泡释放到周围环境中已经成为近几年来越来越受关注的问题。令人信服的证据表明囊泡可交换复杂的信息有助于这种兴趣的兴起。但是,也已经清楚,不同类型的分泌囊泡共存,具有不同的细胞内起源和形成模式,因此可能具有不同的组成和功能。外泌体是分泌囊泡的一种亚型。它们在真核细胞内的多泡小体中形成,并且当这些多泡小体与质膜融合时分泌到细胞外。有趣的是,不同的分子家族已被证明参与细胞内形成外泌体及其随后的分泌,这表明即使在外泌体中也存在不同的亚型。
由于这些胞外囊泡(EV)与生理和病理状况之间的关系,人们对EV的兴趣呈指数增长。 EVs对新型诊断和临床转化有很大希望。近的研究已经将这些交流所需的一些任务归结为细胞外囊泡(如外泌体和微泡),主要参与髓鞘胶质细胞和神经元之间的相互信号传递从而促进神经元存活、由小胶质细胞介导的免疫应答、突触组装和可塑性。这种囊泡也被认为是神经变性疾病和脑病扩散的重要因素。这些细胞外囊泡功能为以前无法识别的神经系统内跨细胞相互作用增加了新方式。确认外泌体生理作用的单独方法就是明确外泌体的释放机制,通过促进或压制释放机制。
外泌体是由各种细胞分泌的小型膜囊泡(直径30~100nm),存在于大多数体液(如血液、尿液、髓液等)和细胞培养液中。外泌体是由脂质双层膜包被的膜囊泡,产生于称为多囊泡体的细胞外囊泡中,多囊泡体通过与细胞膜融合将外泌体释放到细胞外。外泌体含核内体来源的蛋白质(如ESCRTs)、细胞内运输相关蛋白(如RabGTPase等)及细胞膜来源蛋白(如CD63, CD81等)等各种内分泌细胞来源的蛋白和RNA,同时还含有分泌细胞膜来源和内体膜来源的脂质(如胆固醇和鞘磷脂等)。从症状患者树突状细胞释放的外泌体中,含有各种症状细胞来源的蛋白质。浙江体液外泌体WB
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l 慢病毒介导CD63-GFP表达:将外泌体的特定蛋白CD63和绿色荧光蛋白GFP的表达元件构建成质粒再包装到慢病毒中,随后用此慢病毒传播细胞,使细胞分泌的外泌体带有绿色荧光。外泌体功能研究:将标记的外泌体加入受体细胞培养基中,与受体细胞进行共培养,观察细胞的功能变化,如细胞增殖、迁移与侵袭、细胞凋亡等;或者将外泌体注射入动物模型中,观察动物表型变化和检测动物相关指标。外泌体(exosomes)是一种能被机体内大多数细胞分泌的微小膜泡,具有脂质双层膜,直径大约为 30-150 nm。外泌体普遍存在并分布于各种体液中,携带和传递重要的信号分子,形成了一种全新的细胞-细胞间信息传递系统,影响细胞的生理状态并与多种疾病的发生与进程密切相关。黑龙江组织外泌体染色