外泌体是在研究网织红细胞的成熟过程中被Johnstone等人发现并命名的。外泌体是一种球形的纳米级细胞外囊泡,直径30~100nm,密度1.13~1.19g/ml。在生理和病理条件下,外泌体都可以被一些细胞以胞吐的方式所释放,如:免疫细胞、干细胞、种瘤细胞,并且其普遍分布于各种体液中,如:尿液、唾液、血液、羊水、脑脊液及病理性腹水等,同时,由于其起源于相应的母细胞,故种瘤细胞来源的外泌体有望成为一种全新的非倾入性检查替代以往的组织活检技术。实际上,用PS亲和法提取的人白血病细胞释放的外泌体。黑龙江鼻腔灌洗液外泌体
理论上,所有促进肺病细胞分泌外泌体的机制都可以被用来作为肺病医治的潜在靶点,但目前关于其可行性的研究还比较少。有研究表明,种瘤来源的外泌体对种瘤免疫的调控具有一定的影响作用,包括免疫压制和免疫开启两个方面。Romagnoli等研究发现,肺病细胞可以刺激树突状细胞等抗原提呈细胞产生携带特异抗原的外泌体,这些外泌体可以迁移到区域淋巴结,进而开启CD4+T与CD8+T细胞产生抗种瘤免疫反应,进而压制种瘤生长。Besse等研究发现,在晚期NSCLC患者中,装载有IFN-γ,MHC I和MHCⅡ限制抗原的树突状细胞外泌体增强了NK细胞的抗种瘤免疫功能,研究证实外泌体参与相关种瘤生理病理过程,在NSCLC免疫医治中有着重要的临床应用价值,为NSCLC的医治打开了新的视野。细胞外泌体粒径检测随着外泌体研究的不断深入,它的应用已经涉及医学基础和免疫领域、寄生虫领域。
全自动外泌体荧光检测分析系统能够对>50 nm的外泌体进行全方面的表征,无论是粒径尺寸、粒径分布还是外泌体的亚型均可在一次测试中得到。并且所用来测试的样本无需进行纯化,避免因纯化带来的样本偏差。分析不同大小和不同尺度的外泌体亚群,在CD171过表达系统中,100 nm以上的外泌体只表达了CD171。通过抗体捕获的模式,全自动外泌体荧光检测分析系统能够量化含有不同标记物的外泌体亚群,并对不同种群的外泌体进行特异性计数和分析。整个过程无需纯化,并且线性范围可跨越3个数量级。
几乎所有类型的细胞都可以分泌外泌体,同时外泌体也普遍存在于体液中,包括血液、眼泪、尿液、唾液、乳汁、腹水等。目前研究发现外泌体中富含核酸(microRNA、lncRNA、circRNA、mRNA、tRNA等)、蛋白、胆固醇等。外泌体的表面marker主要有CD63、CD81、CD9、TSG101、HSP27等。目前对于外泌体的鉴定主要有四种方法:透射电子显微镜(TEM)、Nanosight、Western Blot、流式细胞术。近年来,随着外泌体研究的不断深入,它的应用已经涉及种瘤医治领域、医学基础和免疫领域、寄生虫领域;临床研究上已涉及心血管系统、内分泌代谢系统等。有关外泌体分泌和摄取及其组成、“运载物”和相应功能的精确分子机制刚刚开始研究。
外泌体是各种细胞外泌的直径在30-100nm之间的膜囊泡。因外泌体内含mRNA、microRNA等核酸和蛋白质对相邻细胞具有交换信息的功能。作为细胞间信号传导的通讯工具和作为病等各种疾病的生物标记话题比较热门。近些年关于外泌体研究很普遍,但是关于外泌体相关的实验技术,关于需要改进的课题存在很多。例如,外泌体提纯方法中,超速离心法和聚合物沉淀法(市售试剂盒)混入多种杂质,给后续实验产生了许多障碍。抗体亲和法和密度梯度离心法,虽然可以提取到高纯度的外泌体,但不能提取完整外泌体,无法分析外泌体具有的生理功能,也是两种提取方法的问题所在。而免疫印迹法(WB)和Elisa检测法作为被普遍应用的外泌体检测的一般方法,又存在检测时需使用大量外泌体和难以检测到低表达水平的标记蛋白。多种细胞在正常及病理状态下均可分泌外泌体。福建外泌体iTRAQ
外泌体分析会引起何种生理作用,这是进一步研究的发展方向。黑龙江鼻腔灌洗液外泌体
在种瘤微环境中,种瘤细胞来源的外泌体能够诱导CD4+T分化为调节性T细胞,压制机体的抗种瘤免疫反应;肺病细胞分泌的外泌体含有miR-21和miR-29a,可在免疫细胞中结合并开启TLR8,使TLR介导的NF-κB信号通路活化,从而导致种瘤的生长和转移。在肺病的侵袭和转移过程中,细胞间通讯扮演着重要的角色。据有关报道称,NSCLC分泌的外泌体内TGFβ和IL10的高表达与肺病的转移密切相关。此外,开启的T细胞可以通过调控Fas信号通路增加基质金属蛋白酶9(MMP9)的表达,进而促进肺病的转移。这些机制有望成为肺病医治的潜在靶点。虽然大多数外泌体都是促进种瘤的侵袭与转移,但也有报道称,外泌体miR-302b可以通过压制TGFβRⅡ来压制肺病细胞的转移与增殖。黑龙江鼻腔灌洗液外泌体