美国密度精子分析频闪光源

精子手工计数原理及操作方法

1.原理：将精液用适当的稀释液作一定量稀释后，混匀注入计数池内计数，再算出每毫升精液中精子数。2.方法（按照***版第四版《全国临床检验操作规程》）1).于小试管内加精子稀释液0.38ml,取液化精液20μl,加入稀释液内混匀。2).充分摇匀后,滴入改良Neubauer计数板的计数池内,静置1~2分钟,待精子下沉后,以精子头部作为基准进行计数。

3.计算1).如每个**中方格内精子少于10个,应计数所有25个中方格内的精子数。2).如每个**中方格内精子在10~40个,应计10个中方格内的精子数。3).如每个**中方格内精子多于40个,应计数5个中方格内的精子数。公式：精子数=计数结果/计数中方格×25×1/计数池高度×20×103/ml=计数结果/计数中方格×1/计数池高度×5×103/ml Hamilton Thorne精子分析仪具有良好的数据管理和报告生成功能，能够方便用户查阅和分享分析结果。美国密度精子分析频闪光源

CASA可将每个精子的活力按以下分级：（1）前向运动型（PR）：精子运动活跃、线性运动或者在较大的范围内运动。（2）非前向运动型（NP）：所有其他非前向运动的形式，如精子在较小的范围内运动，精子头部轻微移位或只观察到尾部摆动。（3）完全不动型（IM）：精子完全不动。CASA系统检测的这些参数有一套标准的术语。（1）VCL=曲线速度（mm/s）。精子头沿其实际的曲线，即在显微镜下见到的二维方式运动轨迹的平均速度。检测细胞活力。（2）VSL=直线速度（mm/s）。根据精子头在开始检测时的位置与***所处位置之间的直线运动的时间平均速度。（3）VAP=平均路径速度（mm/s）。精子头沿其空间平均轨迹移动的时间平均速度。（4）ALH=精子头侧摆幅度（mm）。精子头沿其空间平均轨迹侧摆的幅度。以侧摆的最大值或平均数值表示。（5）LIN=直线性。曲线轨迹的直线性。即VSL/VCL。（6）WOB=摆动性。精子头沿其实际轨迹的空间平均路径摆动的尺度。即VAP/VCL。（7）STR=前向性。空间平均路径的直线性。即VSL/VAP。（8）BCF=鞭打频率（Hz）。精子曲线轨迹越过其平均路径轨迹的时间平均速率。（9）MAD=平均移动角度（度）。精子头沿其曲线轨迹瞬间转折角度的时间平均***值。香港快速运动精子分析W.H.O 6全自动精子分析仪极大提高临床检验水平，广泛应用于泌尿科，男性科以及计划生育、优生优育研究等。

医生处置质量是指诊断质量‚是以当今医学科学知识、技术为基础依据症状来完成的。CASA系统可以为医生提供优于传统精子分析的手段和快速准确的分析结果［5］。CASA在医生处置质量方面的特点在于：①当CASA系统的参数设定和样品的处理方式（温度、稀释法、缓冲液）确定时‚通过个体内和个体间的比较‚CASA的精子活力重复性明显好于直观评估［6］。②实验室数据资料是质量的一部分‚CASA系统所有数据都是直接在线获得的‚因此明显优于其他方法［6］‚记录传递到数据库的过程无错误发生‚可清楚准确地打印出结果。所有的数据可直接转换到数据库、能够对***前和***后测定的数据进行统计学比较［9］、质量控制数据的采集与保存、每天的标本测试记录以及许多其他报告等等‚如此大量数据的处理只有在计算机中才能完成。但是CASA系统的参数设定也许限制了其质量‚特别是在精子形态学检查中‚通过CASA系统对精子形态学特征进行分析［7］‚这些特征（细胞大小、形状、光学密度、尾的存在以及其它）可由操作者选择‚这样就会引起同一标本在不同实验室或不同分析者测得的结果一致性较差［8］。就形态学分析而言‚传统方法的可变性远远大于CASA分析。

精液显微镜检查

(1)精子存活率：排精后30～60分钟，正常精子存活率应为80%～90%，精子存活率降低是导致不育的重要原因。(2)精子活动力：指精子活动状态，也是指活动精子的质量。世界卫生组织(WHO)推荐将精子活动力分为4级：①精子活动好，运动迅速，活泼有力，直线向前运动；②精子活动较好，运动速度尚可，游动方向不定，呈直线或非直线运动，带有回旋；③精子运动不良，运动迟缓，原地打转或抖动，向前运动能力差；④死精子，精子完全不活动。正常精子活动力应在③级以上，若＞40%的精子活动不良(③、④)级，常是导致男性不育的重要原因。精子活动力低，主要见于精索静脉曲张、泌尿生殖系统非特异性***，应用某些药物如抗疟药、雄***等所致。 所有操作人员都应接受规范的CASA分析仪使用培训，严格按照使用指南进行操作‌。

CASA系统也可用于精子形态学评估。CASA系统可用来定量分析精子头部形态学、中段甚至主段的形态，可以把精子头部和中段分类为正常或者不正常，还可以给出头部和中段尺度、头部椭圆率和匀称性的均数、标准差和中位数，以及对染色的精子顶体区进行测量[3]。

与人工操作相比，自动化系统更具客观性，精确度和重复性的潜力[4]。精确度和重复性不低于7%[5]，这优于有经验的技术人员的手工评估。两个研究已经提示在CASA结果与生育力之间存在***联系。Coetzee等发现自动分析的正常精子形态的结果是预示体外受精率和妊娠率的有意义指标[6]。Garrett等发现**中能与透明带结合的、具有某些头部形态特征的精子所占的百分比（Z%），和直线速度（VSL）的精子的百分比，与大样本的低生育力夫妇的自然妊娠率是有***且**的关系。Z%和VSL与生育力间的关系显示是连续的，而且没有显示临界值；高于临界值，妊娠率也不会进一步增加[7]。 IVOS具有高分辨率和高灵敏度的特点，能够捕捉到微小的细节和变化，进一步提高了精子分析的准确性。计数精子分析精确温度控制

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精子计数是在显微镜下计算一次排出的精液中精子的数量将精子计数值乘以精液量就可得出一次**的量。

精液液化后将样本按一定比例稀释和固定后，滴于血细胞计数板上，在显微镜下计数红细胞计数区内的所有精子数并换算为每m1内所含精子数。此外还可用电子细胞计数仪经调整阈值设置后计数精子数量。

将已经液化的精液标本均匀混合，用白细胞计数吸管吸精液至0.5刻度，再吸稀释液至11刻度，振荡三分钟，然后置于血球计数板内，计数二大格（每格面积1平方毫米）之精子数，在尾数后加5个“0”即得每毫升精液内精子数。例如计数为1280个，则每毫升精子应为128,000,000。精液稀释液之配制：重碳酸钠5克、福尔马林1毫升、蒸馏水加至100毫升。稀释液内重碳酸钠有消化粘液的作用，福尔马林有使精子制动的作用。如精液之稠度过高而不易吸取时，可以精液1毫升混匀于稀释液19毫升内，稀释后进行计数。如精子的数目极少，亦可改为稀释10倍计数。每次排精75%的精子是从附睾尾部所贮存的，还有25%是由输精管道的其他部分来的，因此单凭一次排精的精子计数来衡量睾丸生精机能是不***的。只有在排精后间隔4-5天以后多次精液检查，才能比较正确地从这些精子计数来反映睾丸的生精机能。 美国密度精子分析频闪光源