每种PCR方法对比如下:
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数字PCR |
实时荧光定量PCR |
传统PCR |
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概述 |
测量阴性平行样的比例以确定***拷贝数 |
在发生PCR扩增时进行测量 |
在PCR循环结束时测量积聚的PCR产物的量 |
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是否定量 |
是,阴性PCR反应的比例适合泊松统计算法 |
是,因为在PCR的指数期内采集数据,在此期间PCR产物的数量与核酸模板量成正比 |
否,但是比较凝胶上的扩增条带的强度与已知浓度的标准品可进行半定量 |
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应用 |
***载体***定量 核酸标准品***定量 下一代测序文库***定量 稀有等位基因检测 基因表达***定量 混合物富集和分类 |
基因表达定量 质量控制和检测验证 病原体检测 SNP基因分型 拷贝数变异 microRNA分析 ***定量 siRNA/RNAi实验 |
DNA扩增 基因分型 分子克隆 具备一键式自动化操作。北京广东数字PCR正规代理 |

研究方向
低丰度及稀有序列的精确定量
目前对于低丰度目标序列的检测,定量PCR、杂交、毛细管测序及NGS等方法都因受到背景DNA的干扰,使得检测灵敏度及精确性都达不到精细定量的要求(如定量PCR检测中Ct值大于33的情况下,其重复性就不是很高), 而微滴式数字PCR系统通过**的微滴化处理,使得稀有的核酸序列从大量的背景DNA中分离出来,从而提高了检测的灵敏度及重复性。
此外,由于样品微滴化处理的同时,也将样品中可能存在的***剂进行了分装,提高了数字PCR扩增对于***剂的耐受程度,因此可具体应用于很多临床样品(血液、尿液、粪便、痰液、脑脊液等)中对**核酸标记物的检测。一般而言,毛细管电泳和定量PCR的检测灵敏度约在10%;NGS的灵敏度可达到1%;而ddPCR的检测下限为0.001%。 北京广东数字PCR正规代理关于病原菌的检测鉴定。

研究方向
病原微生物的检测(***、细菌等)
疾病预防控制中心、出入境检验检疫局系统的实验室目前主要采用基于TaqMan探针法的定量PCR体系对病原微生物进行核酸水平的检测,而这些目前正在使用着的检测体系可以无缝地转移到QX200上,从而满足该类实验室对于检测结果的要求:灵敏度更高、重复性更好、无需依赖标准曲线的***定量结果,同时操作简便。
对于其他类型的研究实验室,也可以利用ddPCR灵敏度高的特点,对各种样品中的病原微生物展开***的研究。如HIV抗逆转录***治疗过程中***残留量的监控;HBV耐药突变的检测;HCV的分子分型;抗甲氧西林金黄色葡萄球菌的院内***监控;环境微生物不同功能基因之间的连锁分析等等。 能检测低至0.01%的突变基因。

数字PCR也叫Digital PCR(dPCR),是近几年发展起来的一种核酸定量分析技术。相较于传统荧光定量PCR来说,数字PCR对结果的判定不依赖于扩增曲线循环Ct值,不受扩增效率的影响,能够直接读出DNA的分子个数,能够对起始样本核酸分子***定量。
数字PCR基本原理是将一个样本分成几十到几万份,然后再将其分配到不同的反应单元中,使每个微滴单元包含一个或多个拷贝的核酸分子(即DNA模板),每个单元都会对目标分子进行扩增,然后再对每个单元进行荧光信号的统计并计算。相对而言,传统PCR或qPCR反应都是发生于同一体系当中,这也是数字PCR与其比较大的区别。 检测数量一次可达96个样品。广州微流控芯片数字PCR原理
单次微滴生成*需2分钟。北京广东数字PCR正规代理
目前数字PCR技术在临床领域已经有着非常***且***地应用,例如在病原微生物检测中的应用:HBV检测、HIV检测、甲型流感病毒检测等;在产前诊断中的应用:13/18/21号染色体三倍体检测、遗传性耳聋检测、地中海贫血检测及优生五项的病毒检测等;在**靶向***相关基因检测中的应用:肺*EGFR基因突变、ALK基因融合检测、结直肠*KRAS、BRAF基因突变检测、乳腺*HER2基因扩增检测、神经胶质瘤IDH基因突变检测等。以**靶向***相关基因检测为例,在**形成的超早期,会出现**细胞的坏死和凋亡,这些凋亡或坏死的**细胞会释放其DNA进入外周血,因此通过分析循环血液中是否含有**特异的游离DNA就可以达到**早期筛查的目的。然而此时DNA含量极低,对检测的灵敏度和精确性要求极高,目前只有数字PCR技术可以检测出来。另外进行个体化***时,需要对基因组样本进行分析,此时利用数字PCR技术也能**提高结果的可信性,进而建立合理***方案。
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数字PCR(DigtalPCR)是一种核酸定量精密检测的新兴技术手段,源于于20世纪由Vogelstein等提出。它是将稀释后的核酸模板分配到大量不同的反应单元中,使每个反应单元中有一个或没有核酸。利用PCR扩增的同时,加入可检测荧光。待扩增结束时,使用统计学方法采集每个反应单元出现的荧光次数,从而定量检测样本中的核酸浓度。基于分液方式的不同,数字PCR主要分为3种:微流体数字PCR、微滴数字PCR和芯片数字PCR,数字PCR仪器目前是市场测试校准高的。浚和(上海)仪器科技有限公司是一家专业提供数字PCR的公司,有想法可以来我司咨询!苏州国产数字PCR价格数字PCR数字PCR采用的策略概括起来...