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两种更多测试的模拟分析信号放大技术是免疫PCR和生物条形码分析。免疫PCR通过将检测抗体标记为DNA分子,然后使用PCR进行扩增和定量,从而提高灵敏度。生物条形码分析利用了与DNA“条形码”标记的抗分析物纳米颗粒,这些纳米颗粒在与捕获在金微粒上的分析物结合后,从纳米颗粒上脱杂以进行定量。这两种方法相对于传统免疫分析法的灵敏度提高了10到100倍,但尚未整合到所需的全自动系统中,也未用于多重分析。为了比较大限度地加速药物发现、验证新型生物标志物并将分子水平诊断引入临床主流,需要一种具有高效率、高质量数据和成本效益的稳健、多重超灵敏蛋白质检测技术。芯弃疾JX-8B数字ELISA,多重超敏、微量极速、灵活开放,每个实验室都用得起的单分子免疫检测产品 ,创新型多通道ELISA检测;
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是目前新型型的单分子检测方法的低成本版、普及版!每个生物/医学实验室都用得起的单分子免疫检测!!使用现有平台就能做的单分子免疫检测!!具有以下特点:多重、超敏、微量、极速、灵活、开放 阵列单分子数字ELISA开放芯弃疾JX-8B单分子ELISA检测产品,低成本、便捷、快速进行微量样本的检测;
芯弃疾JX-8B数字ELISA产品每个生物实验室都用得起的单分子免疫检测SiMoA通过将单个酶产生的荧光团限制在极小范围内,从而能够检测到非常低浓度的酶标记物体积(~50fL),导致荧光产物分子的局部高浓度。为了在免疫测定中实现这种定位,在第二步中,将珠子加载到一个阵列为离散的微升大小的孔(图1C)。本研究中使用的2毫米宽阵列有~50,000个孔,孔径为μm,孔深为μm。加载后的阵列在含有荧光酶底物液滴的情况下,用橡胶密封圈密封。Rissin等人,第3页将每个微球隔离在飞升反应室中。具有单一酶的微球标记的免疫复合物在50飞升的反应室中产生局部高浓度的荧光产物(图1D)。通过使用标准显微镜光学系统获取阵列的时间变化荧光图像,可以区分与单一酶分子相关的微球(“开启”孔)和不与酶相关的微球(“关闭”孔);补充图1显示了“开启”和“关闭”孔的荧光直方图。成像阵列可以成千上万的单个免疫复合物同时检测。通过测定供试品中的蛋白质浓度来确定计算含有珠子和荧光产物的孔数相对于含有珠子的孔数(图1D)。使用SiMoA,浓度是因此,我们称SiMoA应用于检测单个免疫复合物为数字ELISA。
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在前列腺切除术后患者中,能够准确量化PSA水平的能力,即使在非常低的浓度(<300fM或10pg/mL)下,也应提供如果PSA水平升高,早期提示复发17,29。图4显示PSA水平使用数字ELISA在30名接受治理性前列腺切除术且术后至少6周采集血液的患者血清中进行测量。所有30例患者的血清PSA水平均低于商业检测限采用PSA数字ELISA(图3A)对全血清样本进行稀释1:4后测定,成功检测到所有30例患者中PSA,浓度范围为14fg/mL至9.4pg/mL,平均浓度为1.5pg/mL。需要进一步的临床研究来确定在RP患者中测量PSAfg/mL水平的诊断益处。 新型的单分子检测方法的普及版;
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人类形式的蛋白质被加入到25%牛血清中以代替临床测试样本;通常使用四倍稀释因子以减少免疫测定中的基质效应4。使用数字ELISA检测25%血清中的PSA,从该实验中确定了LOD为~50aM(1.5fg/mL),相当于整个血清中的LOD为~200aM(6fg/mL)。检测到的比较低浓度为250aM,相当于25%血清中的1fMin全血清。由于LOD是通过外推背景浓度来确定的加上背景的三个标准差,不同运行的LOD取决于背景的CV。在具有典型背景方差的几个实验中,全血清PSA的亚飞摩尔LOD得以保持。相比之下,一种前列的商业PSA检测方法(ADVIACentaur,西门子)报告在人血清中的LOD为3pM(0.1ng/mL),并且已经报道了LOD在10-30fM17,26。 芯弃疾JX-8B简易版单分子ELISA检测产品,超敏检测,常规试剂可轻松达到0.2pg!芯弃疾-勃望初芯数字ELISA使用速度
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通过SiMoA对酶标记物进行数字检测的线性动态范围由区分“开启”和“关闭”孔的能力决定。在酶与珠子的比例较低(小于约1:10)时,泊松统计表明,只有统计学上有效果的群体珠子是指含有零和一个酶的珠子。只要足够多的珠子被检测,单个酶就可以被检测到,并且活性珠子的数量会超过泊松分布计数活性微球的噪声。在酶与微球的高比率(大于约(1:10),活性珠子的比例变得更高,泊松统计表明有大量含有多种酶的微球。为了定量检测到的酶的数量并保持含有多种酶的微球亚群中的线性对于酶,我们使用泊松统计法将活性珠子的数量转换为检测到的酶的数量 芯弃疾-勃望初芯数字ELISA使用速度