参考原理:血液中单个蛋白质分子的检测有助于识别许多新的诊断性蛋白质标记物。我们报告了一种同时检测数百至数千个单独蛋白质分子的方法,该方法能够检测到非常低浓度的蛋白质。蛋白质被捕获在显微珠上,并用酶标记,每个显微珠上有一个或零个酶标记的蛋白质。通过将这些显微珠分离成50飞米的阵列反应室,单个蛋白质可以通过荧光想象检测到。通过单化这些阵列中的分子,~10-20种酶可以在100μL(~10−19M)中检测到。单个基于酶标记的分子酶联免疫吸附试验(数字ELISA)能够检测血清中临床相关的蛋白质,其浓度(<10−15M)远低于传统ELISA3-5。数字ELISA在所有接受防冶性前列腺切除术的患者血清中检测到前列腺特异性抗原,比较低至14fmol/mL(0.4fmol)。
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每个生物实验室都用得起的单分子免疫检测
人类形式的蛋白质被加入到25%牛血清中以代替临床测试样本;通常使用四倍稀释因子以减少免疫测定中的基质效应4。使用数字ELISA检测25%血清中的PSA,从该实验中确定了LOD为~50aM(1.5fg/mL),相当于整个血清中的LOD为~200aM(6fg/mL)。检测到的比较低浓度为250aM,相当于25%血清中的1fMin全血清。由于LOD是通过外推背景浓度来确定的加上背景的三个标准差,不同运行的LOD取决于背景的CV。在具有典型背景方差的几个实验中,全血清PSA的亚飞摩尔LOD得以保持。相比之下,一种前列的商业PSA检测方法(ADVIACentaur,西门子)报告在人血清中的LOD为3pM(0.1ng/mL),并且已经报道了LOD在10-30fM17,26。 国产数字ELISA微量样本芯弃疾JX-8B简易版单分子ELISA检测产品,极速检测,检测用时只需要 15-30min!
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我公司推出的数字化高灵敏ELISA芯片检测产品应用场景:适合生物实验室、医学实验室、科研市场、产品预研、产品开发、ELISA检测、动物病情检测等各种应用场景应用范围:各种高灵敏多重免疫检测,可替代各种ELISA试剂盒,及其他免疫检测产品。
将200,000个功能化DNA捕获探针与100μL孵育含有目标DNA的溶液(5‘-TTGACGGCGAAGACCTGGATGTATTGCTCCTCTGAACGGTAGCATCTTGACAAC-3‘孵育2小时后,移除DNA靶标溶液,用0.2×SSC缓冲液洗涤珠子三次含有0.1%Tween-20的微球重新悬浮并与10nM混合生物素标记的信号探针(5‘-TACATCCAGGTCTTCGCCGTCAA/生物素/-3’)对目标DNA具有特异性,孵育1小时。然后将珠子在去除信号探针后用含0.1%吐温-20的0.2×SSC缓冲液洗涤三次。随后向珠子沉淀中加入10pMS阝G溶液,混匀并混合1小时。然后将珠子分离并在含0.1%吐温-20的5×PBS缓冲液中洗涤六次。重悬于10μLofPBS中并加载到飞升微升孔阵列上。
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它是一种DVD大小的圆盘,由24个阵列组成,每个阵列包含240微米大小的微孔,这些微孔呈径向排列,以便使用蓝光制造工艺和仪器内的液体处理并行处理。图2B显示了集成阵列及其相关流体通道的设计。每个阵列由216,000个40飞升大小的微孔组成,以六边形紧密排列模式排列在平面表面的3×4毫米区域内。每个微孔的标称尺寸为4.25µm直径、3.25µm深度和8µ米中心间距。流体通道深0.5毫米,通道和流体入口端口的总体积为74µLto,可容纳珠子和密封油溶液。通道中包含一个收缩部分以减少液体回流。微珠的分级是西莫亚技术的关键要求,微孔的几何形状足以容纳单个微珠(2.7µmdiameter;以下简称珠子)。西莫亚圆盘由环烯烃共聚物(COP)制造,因其具有高通量注塑成型的适应性,且成本低廉。具有良好的化学、生物和光学性能 芯弃疾JX-8B单分子普惠化ELISA检测产品,人人都用能得起的单分子检测;
芯弃疾JX-8B数字化高灵敏ELISA芯片检测产品;应用范围:各种高灵敏多重免疫检测,可替代各种ELISA试剂盒,及其他免疫检测产品。生物实验室、医学实验室常见问题:多指标(如细胞因子)要检测多次;常规检测方法(ELISA、化学发光)等,不能进行多重检测;同一个样本要测试多个指标,就得测试多次,即增加成本、时间,也浪费了样本和试剂。
芯弃疾JX-8B数字ELISA高敏检测产品;先进新型的单分子检测方法的普及版;每个生物/医学实验室都用得起的单分子免疫检测;使用现有平台就能做的单分子免疫检测;
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simoa产品为什么很难普及:主要问题:效果好、但成本高、平台庞大、不灵活、不开放;大部分实验室买不起设备!即使公用平台上了设备,大部分课题组也用不起耗材试剂!仪器:巨大,价格>300万;芯片+试剂:每套1万元以上;
Simoa的技术方案很难小型化,大部分反应流程都在芯片外进行,必须依赖大型自动化设备,与大部分生物实验室、医学实验室的灵活、低成本使用场景不符。 POCT数字ELISA试剂开放