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传代接种：当原代培养瓶中的细胞已经生长且布满了所有可用的培养基质后，它们必须进行传代以便为继续生长提供空间。这通常需要将细胞尽可能轻柔地从基质上用胰酶消化下来。这些酶类似于原代培养中使用的酶，它能够打断使细胞粘附到基质上的蛋白键。有些细胞株可以通过轻轻刮除培养瓶底部的细胞加以收集。收集之后，将细胞悬液进行进一步的分散并置于新的培养瓶中。当细胞过多时，则可以用合适的低温保护的试剂，如二甲基亚砜或甘油进行小心冰冻，然后置于低温环境（－130℃以下）中，直到需要再次使用。如果培养液的量在5ml以下，可以采用旋转瓶培养。济南原代细胞分离试剂盒厂家推荐

原代细胞的几大特点：1、生命的起源原代细胞人体起源一个单细胞受精卵(*代干细胞)，经历卵裂(干细胞持续扩增，增加细胞数量)、胚层出现(干细胞开始分化出功能细胞)、组织部位形成(功能细胞的有序排列)及胚后发育这样一个连续过程。2、维持人体动态平衡的种子细胞人体通过干细胞化来实现细胞更新。成年并不意味着细胞增殖和细胞分化的结束，而仍然存在着受调控的组织更新过程。在一些组织中，如骨髓、表皮等，新细胞可不断地产生，以补充因分化而衰老、死亡的细胞。干细胞的增殖保持着机体内细胞的动态平衡。济南原代细胞分离试剂盒厂家推荐取样后培养时间较少需要一周以上的时间，期间可换液或者传代。

原代细胞的基本结构及作用：1.细胞质（Cytoplasm）细胞膜包着的黏稠透明的物质,叫做细胞质。在细胞质中还可看到一些带折光性的颗粒,这些颗粒多数具有一定的结构和功能，类似生物体的各种部位，因此叫做细胞器。例如,在绿色植物的叶肉细胞中，能看到许多绿色的颗粒，这就是一种细胞器，叫做叶绿体。绿色植物的光合作用就是在叶绿体中进行的。2.细胞核原代细胞质里含有一个近似球形的细胞核（nucleolus）,是由更加黏稠的物质构成的。细胞核通常位于细胞的，成熟的植物细胞的细胞核，往往被液泡推挤到细胞的边缘。细胞核中有一种物质，易被洋红、苏木精、甲基绿等碱性染料染成深色，叫做染色质（chromatin）。生物体用于传种接代的物质即遗传物质，就在染色质上。细胞核的机能是保存遗传物质，控制生化合成和细胞代谢，决定细胞或机体的性状表现，把遗传物质从细胞（或个体）一代一代传下去。但细胞核不是孤立的起作用，而是和细胞质相互作用、相互依存而表现出细胞统一的生命过程。细胞核控制细胞质；细胞质对细胞的分化、发育和遗传也有重要的作用

细胞冻存：通常我们不推荐重新冻存原代细胞，因为这可以促进细胞衰老和/或导致功能变化。原代细胞非常敏感，重新冻结可能导致细胞死亡或损伤。与细胞系不同，原代细胞增殖有限，我们建议尽早使用原代细胞进行实验以防止遗传漂移，如果你正在使用一个增殖困难的细胞类型，你应该密切监测细胞形态，因为少量混杂的细胞（如成纤维细胞）可能随着时间的推移，大量生长从而成为主要细胞。正常的原代细胞培养，在无污染的情况下，建议培养基中不加抗体，抗体会影响细胞的某些基因变异从而导致实验数据有差异，所以cellsystems的细胞在分离提取时就考虑到这点，他们不会采用任何抗体去分离和纯化的同时，通过酶消化或者离心洗涤的方法让细胞达到95%以上的纯度，这样得到的实验数据更为准确要避免经常翻动和振动，否则组织块不易附着于瓶壁上或附着后也会脱落飘起。

原代细胞体外培养现状：原代细胞自然生长有两种方式，锚定依赖或非锚定依赖，这主要取决于它们在体内的组织来源：外周血（非锚定依赖）或固体组织部位（锚定依赖）。原代细胞一旦分离后，24-48h内需要进行贴壁或起始，开始培养。广义地说，所有的哺乳动物细胞，无论其类型或来源，都需要在与人类生理条件非常相似的条件下生长。此外，它们还需要一个pH可调节的生长环境，并且培养基中需包含细胞类型特定的营养因子、生长因子、葡萄糖和/或物品。为了确定一种特定细胞类型在低至无血清培养基中正常生长和功能所需的较低条件，相关研究工作已经揭示了生长培养基必须包含的基本成分：胰岛素、转铁蛋白、葡萄糖和各种盐、维生素和氨基酸1。然而，除此之外培养基也可以含有组织和细胞特异性细胞因子和增殖、生存所需的生长因子。例如，原代内皮细胞和血管平滑肌细胞都需要添加L-谷氨酰胺和成纤维细胞生长因子（FGF），但是，应该添加额外的组织特异性因子，以防止成纤维细胞的生长。具有体内组织特异性特征并且纯度高。济南原代细胞分离试剂盒厂家推荐

能够进行悬浮培养的细胞，其生命力一般都比较旺盛。济南原代细胞分离试剂盒厂家推荐

原代细胞的培养与建系细胞的来源多样，培养方法也各不相同，凡是来源于胚胎、组织部位及外周血，经特殊分离方法制备而来的原初培养的细胞称之为原代细胞。原代细胞经分散接种之手段称为传代。凡能经传代方式进行再次培养的细胞称为传代细胞。若能稳定生长传至10~20代以上的细胞可确立为细胞系。若有条件能开展单细胞克隆、纯化，经大量扩增后所形成的生物学特性稳定的克隆化细胞群，称之为细胞株或克隆细胞。此过程称为细胞的纯化或细胞克隆。这些基本技术是从事细胞培养工作的基础，只有熟悉和掌握了基本技术,才可能更快捷地学习和掌握其他方法,本章重点叙述常用的基本技术。靠前节原代细胞的取材人和动物细胞的取材是原代细胞培养成功的首要条件，是进行细胞培养的靠前步，若取材不当，将会直接影响细胞的体外培养济南原代细胞分离试剂盒厂家推荐