常见检测细胞: **细胞(MDA-MB-231, MCF-7, HT1080, B16F10)等,用孔径为8μm的培养小室巨噬细胞、单核细胞 PMN:用孔径为5μm的培养小室内皮细胞(HUVEC)、白血病细胞 K562、骨髓瘤细胞HB124:用孔径为 3μm或5μm的培养小室 具体操作: 以配合24孔板的8μm PET膜Millicell®悬挂式细胞培养小室(cat#MCEP24H48)为例,实验周期:3-5天 复苏代数靠前的**细胞,在含有10%FBS的培养基中预先培养2-3代,待细胞汇合达到80%左右,饥饿处理18-24小时。 准备铺胶: a) 4 °C融EMC胶过夜。 b) 将细胞小室、培养板和***头等于4°C 预冷。上海益启生物细胞检测试剂盒的销售电话。青浦区干细胞培养细胞培养规格
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每隔2天用电阻仪测量细胞跨膜电阻值,直到达到平台,提示细胞已经形成致密单层;或者通过检测荧光染料荧光黄的通过率,以判断细胞刚好完全汇合。电阻仪测量因不伤害细胞,可以继续培养而比荧光黄法更为普遍地被采用。细胞单层汇合后,用DPBS清洗一次细胞,加入含有不同浓度药物(一般10-200μM)的缓冲液。如果要测药物从上至下的运输效果,则上层小室中加药物,下层培养板孔里只加缓冲液;反之则相反。将培养板在37℃条件下培养(60rpm震荡或者不震荡)1-2h,到达时间之后,分别从细胞小室和培养孔里取出一定 体积缓冲液(一般50μL )转移至新的转运分析板进行LC/MC分析。对于放射性标记药物,分别取出20μL缓冲液加入100μL闪烁液,通过多孔闪烁读板仪读值。
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