操作模式 常规与切向流 : 常规溶液过滤(NFF)中液体在压力或真空驱动下直接流 过膜。大的颗粒物被膜截留并堆积在膜上,小分子则通过膜流出。NFF 常 用于无菌过滤、澄清预过滤及*** / 蛋白样品制备等。切向流过滤(TFF) 液体流过时与膜表面呈一定角度,被膜阻挡的大颗粒物不会累积在膜表 面,而且还会被切向流从膜表面扫除,因此 TFF 成为按分子大小不同分离 的主流方法。TFF 在大体积样品处理中是主要的操作方法,而现在,TFF 技术被用于 Amicon® Ultra 离心式超滤管的设计中,使小体积样品的浓缩 和分离操作也变得更加方便。超滤浓缩管具体报价多少呢。浓缩管代理价格
外泌体的精制磁珠法富集精制外泌体:300μg样品(相当于300μg总蛋白)用含有5μg anti-CD63抗体的溶液稀释,与protein A/G磁珠共孵育1hr,漂洗后用0.2M glycine洗脱。如果要先将抗体偶联在磁珠上(以避免抗体洗脱下来对外泌体的干扰),请参考默克磁珠操作说明书。(Protocol C - Antibody Crosslinking Using Bis(sulfosuccinimidyl) suberate (BS3))。推荐使用试剂目录号信息:cat# CBL553t 和cat# OP171以及LSKMAGAG02。 默克已经建立了基于“微滤+超滤”的外泌体制备操作标准,相较于需要昂贵的设备及繁琐操作的超速密度梯度离心,用实验室常见的工具解决外泌体制备的高大上问题,真是惠而不费,不亦乐乎?徐汇区浓缩管商家上海Millipore超滤浓缩管授权代理商!
截留 截留有时也称为排阻。水合程度、离子和空间位置效应会导致分子量相近 的分子表现非常不同的截留状态。许多生物大分子在不同的 pH 或离子强 度改变的情况下倾向于聚集或改变构象,因此其有效大小可能比 “天然” 分子大恨多,从而导致排阻增加。比如,有些蛋白质在某些缓冲液条件下 会发生多聚化,而另一些则发生解聚(如血红素蛋白)成亚基。这使选择 合适截留分子量的膜变得复杂。以默克密理博的经验,我们通常推荐选择 为目的分子大小一半的膜作为尝试的优先,再根据实际情况加以调整。
膜的吸附损失 对于浓度很低及珍贵的样品,除了考虑截留效率和操作方便外,额外 要关注的是采用的超滤膜及设备对目标蛋白的潜在非特异性吸附损 失。不同膜材质对生物分子吸附程度不同,默克密理博的 Ultracel® 再 生纤维素膜在各类膜中对生物分子吸附**小,是 Amicon® Ultra 超滤管 等超滤产品成为优先的**技术关键之一。滤膜和装置表面对溶质的 吸附对样品收率会产生直接影响,所以如果希望尽可能提高得率,就 应该考虑采用较小的设备和膜面积。小量的、较为稀释的样品应该选 用膜面积小的装置,同时保证一定的流速。默克密理博设计了一系列 离心式或搅拌式装置,配合不同的膜面积、不同的截留分子量的切向 流系统,支持您获得理想的处理效果。益启生物公司专业致力于超滤浓缩管代理销售。
浓度:当需要截留的样品浓度很低时,通量通常不受浓度影响。操作过 程中,随着溶质浓度的升高,增加的粘滞性和极化将导致通量降低。 温度:粗体,作为获得压力、浓度一样的词条通常增加操作时的温度可 以提高超滤效率。每增加 1℃蛋白扩散率增加 3-3.5%,同时溶液粘度降低。 实践中一般是以样品和设备能耐受的比较高温度来操作。 pH:改换溶液和 / 或 pH 常常改变分子结构,蛋白尤其如此。在蛋白的 pI 值蛋白会沉淀,产生堵塞和得率损失。 污垢:溶液中除了目的分子造成的浓差极化,还有其它小颗粒和分子会 在膜上富集和沉淀,逐渐堆积在膜孔上或膜孔结构中,形成结晶和沉淀。超滤浓缩管的系列有很多种。徐汇区浓缩管商家
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通量(超滤效率)及其影响因素 超滤过程中需要在速率和回收率之间平衡以期获得比较好的效果。滤膜的 通量的定义是流量除以面积,使用高 NMWL 滤膜可以增加通量,但同时 会降低回收率。选择膜和装置时需要同时考虑截留分子量和通量。而参 与影响通量的因素很多,包括: 压力:较为稀释的蛋白溶液或胶体悬液进行超滤时,流量随着跨膜压力 (TMP)的增大而增加。正压条件下操作,如 Stirred Cell 搅拌式超滤杯, 这种因素影响较为明显。如果极化影响***,通量会达到一个平台,甚 至可能随着压力的增加而降低。浓缩管代理价格