四硫磺酸钠亮绿培养基(TTB)基础是一种用于微生物学检验的选择性培养基,特别适用于沙门氏菌的选择性增菌培养。它遵循中国药典(ChP)标准。**成分**:该培养基的主要成分包括蛋白胨、牛胆盐、碳酸钙和硫代硫酸钠。其中,蛋白胨提供碳源、氮源和维生素以满足细菌生长的需求;碳酸钙能中和细菌产酸及吸收有毒的代谢产物;硫代硫酸钠和四硫磺酸钠结合可抑制肠道共生菌,而具有四硫磺酸钠还原酶的细菌能在此培养基中繁殖;牛胆盐和煌绿可抑制大肠群菌和其他革兰氏阳性细菌。**pH值**:培养基的pH值通常调节至8.4±0.2(25℃)。**检验原理**:蛋白胨提供细菌生长所需的营养;碳酸钙中和细菌代谢产生的酸;硫代硫酸钠在培养基中与碘和碘化钾反应形成四硫磺酸钠,抑制非目标菌;牛胆盐和煌绿抑制革兰氏阳性菌。**用法**:称取培养基46.0g,加热溶解于1000ml纯化水中,121℃高压灭菌15分钟。临用前,每1000ml培养基中加入碘试液20ml和亮绿试液10ml,混匀后分装备用。**添加剂**:每瓶培养基需配套添加碘液和0.1%煌绿水溶液。碘试液由碘6g与碘化钾5g加水20ml溶解制成。亮绿试液由亮绿0.1g加水100ml溶解制成。结晶紫中性红胆盐琼脂培养皿是一种常用的选择性培养基,用于微生物学实验室中对肠道病原菌的检测和分离。活性炭酵母琼脂平板
锰盐营养琼脂(ManganeseNutrientAgar)是一种用于微生物培养的培养基,特别适用于嗜热需氧芽孢杆菌的检验。以下是它的一些主要特点和用途:1.**成分**:通常包含硫酸锰、蛋白胨、牛肉粉、氯化钠和琼脂。其中,硫酸锰的含量为0.0308g/L,蛋白胨为10.0g/L,牛肉粉为3.0g/L,氯化钠为5.0g/L,琼脂为15.0g/L。2.**pH值**:培养基的pH值控制在7.3±0.1(25℃),为微生物提供适宜的生长环境。3.**用途**:主要用于嗜热需氧芽孢杆菌的检验,也可用于芽孢杆菌或梭菌的培养和孢子的形成。4.**检验原理**:蛋白胨和牛肉粉提供碳氮源、维生素和生长因子;氯化钠维持均衡的渗透压;琼脂作为培养基的凝固剂;硫酸锰可促进芽孢的生成。5.**使用方法**:称取本品33.0g,加热溶解于1000ml蒸馏水中,121℃高压灭菌15分钟,备用。需要注意的是,由于培养基中含有少量硫酸锰,灭菌后可能出现微量沉淀。6.**质量控制**:通过接种质控菌株,如短小芽孢杆菌CMCC(B)63202、枯草芽孢杆菌黑色变种ATCC9372等,放置于55℃需氧培养48小时,以验证培养基的性能。YSG琼脂培养皿琼脂培养基的制备: 将琼脂培养基中加入去氧胆酸盐等特定成分,以制备适合特定实验目的的培养基。
木糖赖氨酸脱氧胆盐琼脂(XLD)是一种选择性培养基,用于沙门氏菌的选择性分离培养,以下是其特点:1.**用途**:专门用于沙门氏菌的选择性分离培养,也适用于其他肠道菌的选择性分离。2.**成分**:包含酵母浸粉、L-赖氨酸、乳糖、蔗糖、木糖、氯化钠、硫代硫酸钠、柠檬酸铁铵、去氧胆酸盐、苯酚红和琼脂,pH值控制在7.4±0.2(25℃)。3.**检验原理**:酵母浸粉提供维生素和辅助因子,木糖、乳糖和蔗糖作为可发酵碳源。赖氨酸的加入有助于鉴别沙门氏菌。沙门氏菌发酵木糖产酸,产生的脱羧酶使赖氨酸脱羧,导致pH升高。硫代硫酸钠及柠檬酸铁铵与硫化氢反应,产生黑色硫化铁,苯酚红作为pH指示剂,去氧胆酸盐抑制革兰氏阳性菌的生长。4.**用法**:称取57g培养基,溶解在1000ml蒸馏水中,不要过分加热,冷至50-55℃时倾入无菌平皿,部分开盖干燥2小时,然后盖上备用。无需高压灭菌,在24小时内使用。5.**微生物质控**:使用质控菌株进行微生物灵敏度试验,如肠炎沙门氏菌CMCC50760、大肠埃希氏菌ATCC25922、福氏志贺氏菌CMCC51572等,观察其在XLD培养基上的生长特征。
使用TCBS琼脂进行细菌分离实验的步骤如下:1.**准备工作**:-确保实验室无菌操作条件,穿戴适当的实验服和手套。-准备无菌的接种环、涂布器、无菌吸管和移液器等工具。2.**配制培养基**:-按照培养基包装上的说明,称取适量的TCBS琼脂粉末。-将称取的TCBS琼脂粉末加入到适量的蒸馏水中,通常为100mL。-将混合物加热至沸腾,以确保琼脂完全溶解。3.**冷却和倾注平板**:-将溶解好的培养基冷却至50℃左右(避免过热,以免杀死细菌),此时琼脂应该仍然是液体状态。-将冷却的培养基倒入无菌的培养皿中,一般倾注量为15-20mL/平皿。-等待琼脂凝固,形成固体培养基平板。4.**接种样品**:-使用无菌操作,将待检测的样品涂布或划线接种到TCBS琼脂平板上。-可以使用稀释涂布法、螺旋接种法或其他适当的接种方法。5.**培养**:-将接种后的平板倒置,放入恒温培养箱中。-根据实验要求,通常在36±1℃下培养18-24小时。6.**观察和选择菌落**:-培养结束后,观察平板上的生长情况,记录不同类型菌落的特征。-选择性地挑选出特定的菌落,如蓝绿色或黄色菌落,这些可能是目标弧菌。
PALCAM琼脂基础是一种专门设计用于分离和培养单核细胞增生李斯特氏菌(Listeriamonocytogenes)的选择性培养基。除了李斯特氏菌,它也可以用来分离其他类型的细菌,尽管其选择性成分主要针对李斯特氏菌。**特点**:1.**成分**:PALCAM琼脂基础包含酪蛋白胰酶消化物、心胰酶消化物、肉胃酶消化物、玉米淀粉、酵母浸膏、甘露醇、七叶苷、柠檬酸铁铵、葡萄糖、氯化锂、琼脂和酚红等成分。2.**pH值**:培养基的pH值控制在7.2±0.2(25℃),为细菌提供适宜的生长环境。3.**选择性**:氯化锂和抗生物质添加剂(如盐酸吖啶黄素、硫酸多粘菌素B和头孢他啶)能够抑制革兰氏阴性菌和大多数革兰氏阳性菌,特别是非李斯特氏菌的生长。4.**应用**:主要用于食品、水和污水样本中单核细胞增生李斯特氏菌的选择性分离培养。5.**结果观察**:李斯特氏菌在PALCAM琼脂上生长时,会水解七叶苷生成黑色的6,7-二羟基香豆素,形成灰绿色菌落,中心凹陷,周围有黑色环。尽管PALCAM琼脂基础主要用于李斯特氏菌的分离,但某些非李斯特氏菌,如葡萄球菌和肠球菌等,偶尔也能在该培养基上生长,利用甘露醇产酸使菌落和其周围的培养基呈黄色。
大肠杆菌产酸,因此在EMB上形成带有金属光环的典型颜色,而其他非产酸菌则显示不同的表现。活性炭酵母琼脂平板
轻唾琼脂培养基(MSA)基础,也称为轻型唾液链球菌琼脂培养基基础,是一种用于分离培养轻型链球菌(绿色链球菌)、唾液链球菌(非溶血性链球菌)和肠球菌的选择性培养基。以下是它的一些特点:1.**成分**:该培养基的配方中含有胰酪蛋白胨、牛肉粉、磷酸氢二钾、葡萄糖、蔗糖、台盼蓝、结晶紫和琼脂等。其中,胰酪蛋白胨和牛肉粉提供氮源和碳源,蔗糖作为可发酵的碳水化合物来源,磷酸氢二钾作为缓冲剂,台盼蓝和结晶紫作为染料提供菌落颜色,琼脂作为凝固剂。2.**pH值**:培养基的pH值通常控制在7.0±0.2(25℃),为细菌提供适宜的生长环境。3.**选择性**:通过添加结晶紫和亚碲酸钾,该培养基可以抑制大多数革兰氏阴性杆菌和大多数革兰氏阳性细菌的生长,而对链球菌和肠球菌的生长影响较小。4.**应用**:轻唾琼脂培养基基础主要用于轻型链球菌、唾液链球菌和肠球菌的分离培养,这些细菌在培养基上可以形成具有特征颜色的菌落,有助于后续的鉴定和分析。5.**配制方法**:通常称取90g培养基粉末,加入1000mL蒸馏水或去离子水中,加热煮沸至完全溶解,分装后进行高压灭菌。灭菌结束后,冷却至50-55℃,加入无菌1%亚碲酸钾溶液,混匀后倒入无菌培养皿中。活性炭酵母琼脂平板