用超滤对分子进行分级
通过选定截留分子量的超滤操作能精确地将混在大分子中的小分子去
除的想法常常不切实际。事实上,膜的规格描述是基于截留而非通过
的性质。一项实验中,采用 100k NMWL 滤膜,大于 100kDa 的分子截
留率 >90%,但这时比膜孔径小的分子并不是完全自由地通过滤膜,
75kDa 的分子截留率为 83%,30kDa 的分子也有 32% 被截留。混合的
溶液中的各 种成分通过膜并不像单一成分的溶液那么简单和容易。实
践中,如果要分离两种大分子,它们之间的分子量差异应该达到 10 倍
以上,或至少膜的 NMWL 规格在两种蛋白之间,则可达到比较理想的
分离。如果蛋白溶液较为稀释,低压下操作也有助于达到更好的效果。 超滤浓缩管具体报价多少呢。南京默克2ml超滤浓缩管咨询报价
超滤(UF)常用于分离溶液中极其微小的颗粒和不溶分子。虽然分离效果受到包括化学性质、电荷等多种因素影响,这种方法主要还是以分子大小为**基本的考虑。超滤膜截留1-1000kDa(MW)的分子,盐和水等小分子会透过,因此在大分子样品处理中得到了应用。胶状或微粒状物质也能够被截留。UF膜既可以用于透过样品也用于保留样品的纯化。样品***小于膜孔径,则经过膜处理可以达到除热源、澄清和与大分子污染物的分离的效果。如果目的分子远远大于膜孔径,膜处理则可以将小分子污染物去除而目的分子被浓缩。超滤方法相比沉淀法对于样品更温和,没有发生容易导致生物大分子失活的相变,而且在浓缩的同时可以完成对溶质的除盐。超滤的应用不限于蛋白样品的操作,也常用于核酸样品制备,包括分子克隆和质粒纯化。DNA和RNA样品起始浓度低至5ng/mL也可以被高效地在数分钟内被浓缩,回收率达到99%以上。崇明区默克2ml超滤浓缩管联系电话益启生物公司就带您了解一下 超滤浓缩管的特点。
用于搅拌式超滤杯的Ultracel®预切超滤膜片
Ultracel® 再生纤维素膜可以用来对较为稀释的溶液进行脱盐或浓缩。Ultracel® 膜是亲水性的,微观结构紧密,确保对蛋白、核酸等大分子吸附比较低而回收率比较高。
*膜的常规截留分子量分为1, 3, 5, 10, 30及 100 kDa等。
*膜片直径分为25, 44.5, 47, 63.5, 76, 90及150 mm。
对于大体积、高浓度(如蛋白浓度大于 1.0 mg/mL)的样品进行脱盐和浓缩,Biomax®聚苯醚砜(PES)超滤膜是很好的选择。血清、血浆或条件组织培养基等,都是 Biomax®超滤膜适合处理的样品。
*膜的常规截留分子量为5,10,30, 50, 100, 300和500kDa等。
*膜直径分为25,44.5,47,63.5和76mm。
无血清样品选择 3kDa 孔径是为了尽可能提高外泌体的回收率。
有血清样品选择100kDa/500kDa孔径是为了尽可能去除细胞分泌蛋白以及血清成分中小于外泌体的白蛋白造成的影响。
研究者可根据样品的粘稠程度,以及需要制备的目标外泌体 / 囊泡 / 颗粒的大小分布来选择和优化超滤孔径(3kDa/10kDa/30kDa/50kDa/100kDa),以便达到更好的得率和操作体验。
样品体积大于 30mL 时可以考虑用超滤杯或 Centricon-70 超滤管,请注意搅拌式超滤杯在200mL 以内时吸附损耗可能较离心式超滤管略偏高。如需进一步提高特定外泌体的纯度,可选用包被相应抗体的磁珠进行亲和纯化精制。 超滤浓缩管哪家比较靠谱?
默克密理博 Amicon® Ultra 离心式超滤管因其完美的设计,一经推出即成为生物样品操作的行业**产品。不论是蛋白、核酸、病-毒-或颗粒物,抑或低浓度样品或宝贵的活性样品,Amicon® Ultra 都能兼顾高回收率和操作的方便性及标准化,并满足下游各种应用的要求,使研究者处理样品时倍感轻松。
这款Amicon Ultra 15 mL离心式过滤器借助10 kDa NMWL的滤膜可以进行蛋白浓缩。Amicon Ultra离心式过滤器是蛋白纯化、蛋白浓缩和脱盐的理想工具。
Amicon® Ultra 超滤管的独特优点:
有效浓缩同时保证高的蛋白回收率
1.合理的死体积设计
2.避免样品离干而降低回收率
3.便于估计和控制样品浓缩倍数
4.重复性好,便于样品数据相互比较
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近年来随着分离纯化技术的提高,关于外泌小体的研究成果颇丰;这进一步吸引了越来越多领域的课题将外泌体纳入研究对象。研究的前提是方便、高效、标准化地分离纯化外泌小体。经过近20年的探索,已经建立了超速离心法、沉淀法、色谱法、亲和纯化法等。在大量实践中大家逐渐认识到根据下游研究对样品的要求,以及起始样品的规模、数量,可以选择不同的外泌体制备策略。因不需要特殊的设备和试剂盒,对操作人员也没有特别的经验要求,超滤法后来居上,成为实验室中制备外泌体的通用方法。南京默克2ml超滤浓缩管咨询报价
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