Amicon® Pro纯化超滤管简明操作指南
亲和纯化
用于纯化GST•Tag,His•Tag等重组表达蛋白及抗体,适合~0.5 mL裂解液操作
6次低速离心,总耗时~100分钟(含65分钟孵育时间)
1. 在Amicon® Pro上样池中加入200μL亲和纯化树脂(50%悬浊液)和1.5 mL漂洗缓冲液。
1,000×g离心1 min。
2. 加入0.5 mL样品并与树脂吸打混匀。孵育1 h,其间可温和搅动促进结合。
3. 1,000×g离心1 min 以去除未结合杂质。
4. 加入1.5 mL漂洗缓冲液,1,000×g离心1 min。 超滤浓缩管的好处都有很多。无锡默克2ml超滤浓缩管联系方式
高浓度样品浓缩
Centriprep®超滤管
Centriprep®超滤管是一次性使用的离心管,可以用于2-15mL生物样品的纯化、浓缩、脱盐等过滤应用。这种离心超滤管流速很快,设计紧凑,螺旋盖使用起来非常方便,过滤收集管内置低吸附的Ultracel®再生纤维素膜,装有气密盖。
优点与应用
特有的反向流操作模式,较大的死体积
采用Ultracel®膜,用于浓缩和纯化富含颗粒物
的高浓度样品,样品回收率>90%
配合标准的50mL离心管吊篮式转子使用
从发酵培养基、细胞培养基、细胞裂解液中分
离低分子量溶质 南京默克4ml超滤浓缩管一级代理Millipore超滤浓缩管用于蛋白超滤、浓缩、除盐!
蛋白如果浓缩过快或者过度浓缩都有可能引起蛋白沉淀。建议蛋白浓缩后的**终浓度不超过
20mg/ml。对于对浓缩速度敏感而容易沉淀的蛋白,建议的改进方法是:
1)离心力降为推荐离心力的30%-50%
2)改用截留分子量更大的超滤管(如原本选用10k,此时可以选择30k) 3)在浓缩过程中取出超滤管,用***头反复吹吸几次后再继续浓缩
Amicon® Ultra超滤膜中含有微量甘油。如果出现这种情况,请先用0.1 N NaOH清洗再离心。***用缓冲液或Milli-Q®水再次清洗后甩干。清洗后的滤膜应立即使用,如暂时不用,请保持润湿状态,避免重新干燥。
特点与优点:
特别的反转离心回收设计,滞留体积很小,样品损失少,
样品回收率通常>90%
浓缩倍数达到50-200倍
Ultracel®再生纤维素膜和聚丙烯外壳将吸附降至比较低
特别设计的死体积防止离干,保证样品回收率和活性
有四种截留分子量供选择
法医gDNA鉴定、PCR产物纯化与小分子分离
Microcon® 超滤管
Microcon®为横膜式超滤管,没有死体积,用于大分子样品的浓缩、脱
盐、换液都非常高效方便。实际应用中还常用于大分子与其它分子的分
离,比如蛋白酶切后的处理及药物结合率分析等等。 购买超滤浓缩管就找益启生物公司。
通量(超滤效率)及其影响因素
超滤过程中需要在速率和回收率之间平衡以期获得比较好的效果。滤膜的
通量的定义是流量除以面积,使用高 NMWL 滤膜可以增加通量,但同时
会降低回收率。选择膜和装置时需要同时考虑截留分子量和通量。而参
与影响通量的因素很多,包括:
压力:较为稀释的蛋白溶液或胶体悬液进行超滤时,流量随着跨膜压力
(TMP)的增大而增加。正压条件下操作,如 Stirred Cell 搅拌式超滤杯,
这种因素影响较为明显。如果极化影响***,通量会达到一个平台,甚
至可能随着压力的增加而降低。 上海超滤浓缩管供应商。江苏Millipore超滤浓缩管报价
益启生物公司的 超滤浓缩管系列有很多。无锡默克2ml超滤浓缩管联系方式
核苷酸截留分子量(NCO)
超滤膜的 NMWL 是用球形蛋白标定的,适合各种蛋白研究,但在核酸
和多糖纯化时则要考虑更多因素。这些分子的棒状的三维结构容易漏
过,相对于球形蛋白需要更致密的膜(截留分子量更小)。所以选择
滤膜是更多考虑的是核苷酸长度而非分子量。
浓差极化
浓差极化实质是溶质累积在膜表面造成的堵塞,产生除了膜本身截留分
子量以外的过滤限制。当溶质浓度较高时,会形成相当于第二层滤膜作
用的胶体层,干扰分子通过滤膜,同时降低流速。pH 值、缓冲液的成分
也会影响目的分子的状态而使浓差极化现象加剧或减轻。
无锡默克2ml超滤浓缩管联系方式上海益启生物科技有限公司是一家 从事生物科技(除生物试剂)领域内的技术开发、技术咨询、技术服务、技术转让;室内外装潢;建筑工程设计与施工;展览展示服务;计算机及配件、化工原料及产品(除危险化学品、监控化学品、民用物品、易制毒化学品)实验室设备、服装服饰及辅料、仪器仪表、电子数码产品、普通劳防用品、文体用品的销售。的公司,是一家集研发、设计、生产和销售为一体的专业化公司。公司自创立以来,投身于试剂,耗材,科研试剂,仪器设备,是化工的主力军。益启生物始终以本分踏实的精神和必胜的信念,影响并带动团队取得成功。益启生物始终关注自身,在风云变化的时代,对自身的建设毫不懈怠,高度的专注与执着使益启生物在行业的从容而自信。