对于探索性研究,Western blotting仍是优先平台,是用于评估新抗体和其它蛋白检测分析
法(如ELISA、基于微珠的分析法、流式细胞术和免疫组织化学)的标准。新技术的开发**减少Western blotting过程需要的时间(例如默克密理博的 SNAP i.d.® 2.0系统,目录编
号SNAP2MM),提高了WB实验的效率。
Western blotting的基本程序涉及下述关键步骤
样本制备
凝胶电泳
转膜
封闭非特异性结合
加入抗体
检测
Western Blot 实验流程图
Troubleshooting
问题 可能的原因 处理方法
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叠氮化钠可通过某些偶联方法干扰多种生物实验。因此,进行此类实验时比较好使用离心透析过滤法、透析法或凝胶过滤法除去叠氮化钠,或使用无叠氮化物的抗体。注意:叠氮化钠有毒。对于所有实验室试剂,处理注意事项均请查阅“材料安全性数据表”(MSDS)。抗体为相对稳定的蛋白,能够抵抗较广范围的温和变性条件。当按照生产商的建议条件正确保存时,抗体可保持稳定达数年。
大多数情况下,抗体保存在-20℃时可不损失其结合能力。 徐汇区Abcam抗体抗体参数上海买Sigma抗体哪家靠谱?
比较好避免在无霜冰箱中保存抗体。请查测生产厂家说明书。当在Luminex200仪器上读取分析的读数时,采用4个校准片,根题Luminex推荐的方案调整探针高度至适当位置。当在FLEX0MP3D"仪器上读取分析法的读数时,采用1个校准片,根据Luminex建议的方案调整探针高度至适当位置。当在MAGPK"系统上读取分析的读数时,采用2个校准片,根掘山uminex建议的方案调整探针高度至适当位置。
适当使用封闭剂,且用多道移液器移取液体而不触碰微孔板中的试剂,这样可以遍免孔的交叉污染。增加洗涤次数
除非您正在研究组蛋白和组蛋白修饰,否则您应采用X-ChIP方案,以使您的靶蛋白与DNA的连接稳定。增加交联时间。 蛋白G磁珠能结合更大范践的执体,包括小鼠单克境抗体,为达到抗体选择的比较大灵活性,我们推荐使用蛋白A/G混合物(目录号16-663)。检测PCR引物的效果。加入相应的时维物,必要时重新设计引物。
关于ChIP中关键步骤的详细讨论及实验问题解答,请参考默克密理博染色质免疫沉淀指南(ChIP实验指南)。
酶联免疫吸附实验(ELISA) 上海益启生物的科研抗体销售电话。
酶联免疫吸附实验(ELISA) 是结合了抗体的特异性和简单髓分析法的高灵敏度蛋白检测方法。通过采用抗体-抗原反应,ELISA可以提供抗原或抗体浓度测量。有两种常用的ELISA形式∶双抗夫心EUSA和竞争性ELISA。图解和描述如下B。 实验中**常用的是双抗夹心ELUSA,它用于测定未知样品中的抗原浓度,是**有用的免疫分析法之一。夹心ELISA 快速且准确;并且如果提供纯化的抗原标准品,该分析法可用于生成剂量-反应曲线,用于测定未知样品中抗源的***量。神经抗体的报价具体是多少呢?青浦区WB抗体抗体参数
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问题 可能的原因 处理方法
印迹上出现条纹 在凝胶的蛋白负荷过量。 准确测量蛋白浓度,载入较少的蛋白。
印迹有污染或模糊 凝胶平衡不当,或在实验过程中收缩 检查凝胶平衡时间。
采用丽春红S染色时, 转膜无效 转膜时,小心除去气泡。
印迹染色较差 确保在电转过程中因为温度过高而产生气泡或凝胶/膜变形
采用丽春红S染色时, 在转膜过程中蛋白没有转移 检查设备(转膜盒、盒盖、电源)。
印迹没有染色 检查在转膜过程中凝胶和膜的顺序是 确保膜位于凝胶的右侧。
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上海益启生物科技有限公司是一家 从事生物科技(除生物试剂)领域内的技术开发、技术咨询、技术服务、技术转让;室内外装潢;建筑工程设计与施工;展览展示服务;计算机及配件、化工原料及产品(除危险化学品、监控化学品、民用物品、易制毒化学品)实验室设备、服装服饰及辅料、仪器仪表、电子数码产品、普通劳防用品、文体用品的销售。的公司,是一家集研发、设计、生产和销售为一体的专业化公司。益启生物作为 从事生物科技(除生物试剂)领域内的技术开发、技术咨询、技术服务、技术转让;室内外装潢;建筑工程设计与施工;展览展示服务;计算机及配件、化工原料及产品(除危险化学品、监控化学品、民用物品、易制毒化学品)实验室设备、服装服饰及辅料、仪器仪表、电子数码产品、普通劳防用品、文体用品的销售。的企业之一,为客户提供良好的试剂,耗材,科研试剂,仪器设备。益启生物不断开拓创新,追求出色,以技术为先导,以产品为平台,以应用为重点,以服务为保证,不断为客户创造更高价值,提供更优服务。益启生物创始人张文渊,始终关注客户,创新科技,竭诚为客户提供良好的服务。