利用多肽的不同物理特征，如分子量、电荷和形状，蛋白质复合物可用电泳法（即在凝胶基质上加样并通入电流）分离。以这种方式分离蛋白质的常规方法是SDS-PAGE（十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳法）。通过“跑胶”，可以了解关于蛋白性质的大量信息；而通过把已
分离的蛋白样品从凝胶转移到固相载体膜上（印迹法）并采用特异性抗体进行检测，可以了解更多信息。在用Western blot检测蛋白时，运用高质量抗体对成功而言是至关重要的。 买组蛋白抗体哪家专业？上海H3抗体抗体销售
通过改变参数（见第5.3节）和评估他们对梁色质回收率的影响来优化这些步骤。使用机械力，如杜恩斯匀浆器或坡璃珠改善细脆溶辉。优化裂解步要和避免起泡。 在甲醛中培养时间过长可能掩盖经ChIP抗体识别所需要的表位。如果您使用的是单克隆抗体，此问题可能更加严重。过度交联也可能导致超声处理时复合物难以形成。优化交联步骤∶甲醛的**终液度应为1%;您应确定***的交联时间，然后再继绩进行实验。在研究方案的后续步骤中，交联不足可能引起靶蛋白从DNA解离。
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ChHPAb+trimethy-istione H3Lys917625）∶使用免gG 或AntrimethyHhistone H3Lys9抗体，与Magna ChIP 试剂盒17-610）一起将超声处理后的NH3T3 L1组胞染色质进行染色质免疫沉淀反应。对获取的trimethy-histone H3ILys9DNA精合片段进行qPCR确认，使用的引物为屋p16启动子附近序列。
染色质免疫共沉淀∶相关产品
磁珠
**与ChIP实验的A，G，或A/G蛋白Magna ChIP磁珠经过严格优化，用于ChIP实验中收集沉淀复合物，具有速度快，重复性好，效率高的优点。与常规琼脂糖微珠不同，在反应中，Magna ChIP 磁珠可在磁场作用下快速移动至反应器边缘，***降低免疫沉淀复合物的滞留时间和机械压力。
· 间接检测法
在间接检测法中，用纯化抗体进行解育和目标抗原结合，随后采用荧光标记二抗，形成一抗-焚光二抗复合物，从而实现对目标抗原的检测。·生物素化检测法
第三种方法即生物素化检测法;亲和素是细菌源蛋白，由于它们与生物素的天然亲和力，故如此命名。生物素-镇需亲和素复合物有时叫做molecular velcro"，因其作为一种结合两种分子的研究工具已***用于免疫检测、蛋白组学、亲和纯化以及核酸-蛋白相互作用的分析中。市场上有多种生物素化一抗或二抗可供选择;通过随后对荧光基团结合链霉亲和素的解育进行流式细胞检测。可能会实现信号放大，因为生物素具有四个链霉亲和素结合位点，导致荧光信号可能增加四倍。 Merck抗体的报价具体是多少呢?
无信号 在检测之前，转印膜在贮藏过程中发
生蛋白降解
二抗选择错误
曝光时间太短
抗原上样量不足
抗原可能被破坏
检测系统
一抗的亲和力较低
化学发光底物已丧失活性。
已从膜上剥离抗体并再次杂交。
处理方法 使用新转的膜进行实验。
检查是否使用适当的二抗。
增加曝光时间。
在凝胶上载入更多的抗原，或在载入之前使用超滤管浓缩样品，
或使用免疫沉淀，以增加凝胶中的目标蛋白量。
检查确保电泳处理未破坏抗原性。
增加（和优化）一抗的浓度和培养时间、温度。 上海买Sigma抗体哪家靠谱？黄浦区鉴定抗体抗体代理价格
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对于探索性研究，Western blotting仍是优先平台，是用于评估新抗体和其它蛋白检测分析
法（如ELISA、基于微珠的分析法、流式细胞术和免疫组织化学）的标准。新技术的开发**减少Western blotting过程需要的时间（例如默克密理博的 SNAP i.d.® 2.0系统，目录编
号SNAP2MM），提高了WB实验的效率。
Western blotting的基本程序涉及下述关键步骤
样本制备
凝胶电泳
转膜
封闭非特异性结合
加入抗体
检测
Western Blot 实验流程图
Troubleshooting
问题 可能的原因 处理方法
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