蛋白如果浓缩过快或者过度浓缩都有可能引起蛋白沉淀。建议蛋白浓缩后的**终浓度不超过 20mg/ml。对于对浓缩速度敏感而容易沉淀的蛋白,建议的改进方法是: 1)离心力降为推荐离心力的30%-50% 2)改用截留分子量更大的超滤管(如原本选用10k,此时可以选择30k) 3)在浓缩过程中取出超滤管,用***头反复吹吸几次后再继续浓缩 Amicon® Ultra超滤膜中含有微量甘油。如果出现这种情况,请先用0.1 N NaOH清洗再离心。***用缓冲液或Milli-Q®水再次清洗后甩干。清洗后的滤膜应立即使用,如暂时不用,请保持润湿状态,避免重新干燥。上海超滤浓缩管批发商。普陀区默克2ml超滤浓缩管哪家好
加入漂洗缓冲液(体积是树脂柱床体积的7.5倍)并离心。< 500μL树脂时1,000×g离心1 min;≥ 500μL树脂时2,000×g离心4 min。 4. 使用一个新的50 mL离心管作为收集管。 5. 加入洗脱缓冲液(体积是树脂柱床体积的5倍)与树脂混匀并离心。< 500μL树脂时1,000×g离心1 min;≥ 500μL树脂时2,000×g离心4 min。回收管中即纯化好的蛋白。 6. 如果是纯化抗体,在纯化产物中加入中和缓冲液。 * 进行较大体积操作时,可以延长结合反应时间,并用胶带密封上样池上沿以便颠倒混匀操作。离心前去除胶带即可。选购不带Amicon® Ultra 0.5 mL超滤管的Amicon® Pro时请使用目录号ACS500024。崇明区Millipore超滤浓缩管批发Millipore超滤浓缩管用于蛋白超滤、浓缩、除盐!
蛋白亲和纯化(无需换液和浓缩) * 本操作受Amicon® Ultra-0.5 mL超滤管~1 mg蛋白的容量限制。体积较大而蛋白浓度较低的情况下也可以采用如上方法,但溶液体积和离心时间等需要略加优化。 3次低速离心,总耗时~75分钟(含60分钟孵育时间) 1. 在Amicon® Pro上样池中加入至多1000μL亲和纯化树脂(沉降的柱床体积)和至多9 mL漂洗缓冲液。1,000×g离心1 min平衡树脂。(柱床)树脂量≥ 500μL时采用2,000×g离心4 min。 2. 加入至多9 mL样品并与树脂吸打混匀。孵育1 h*,其间可温和搅动促进结合。
Amicon® Ultra 4 mL 超滤管 -离心速度快而保持很高的回收率 4 种不同蛋白在不同截留分子量的 Amicon® Ultra 4mL 超滤管中浓缩(3kDa 细胞色素 C, 10kDa 细胞色素 C,30kDa BSA,100kDa IgG), 测定在离心一定时间后的回收率。数据显 示所有样品在离心 15 分钟左右回收率均 >95%。 为了方便初次使用者选择**合适的超 滤管产品,默克密理博生命科学部网 站上提供选择指引,您需要按照提 示进行选择,**终会选出一款产品。 为每次实验选择**合适的, 您也能快速成为超滤高手!上海超滤浓缩管供应商。
离心方式的超滤方法进行溶液置换也被称为“渗滤”,操作时样品首先被浓缩,继而加入新的溶液,再次浓缩时,原溶液已经被换成选定的溶液。 化学相容性与溶出 样品的化学背景有时很多样而复杂,过滤的过程中很重要的一点是操作过程不应给样品带来新的污染。所以滤膜和装置与样品接触的其它部分都不能与样品中的化学成分发生反应而产生溶出污染。关于默克密理博各种微滤、超滤产品的化学相容性请参考产品使用说明书或垂询技术支持专线 。回收率及其重要性超滤的**终目的常常是很大程度地回收目标溶质,但膜的很多特性会对这一目的产生影响。影响回收的因素包括:• 标称分子量限制(NMWL)/ 核酸截留分子量(NCO)• 截留 • 浓差极化 • 通量益启生物公司主营超滤浓缩管销售。普陀区默克2ml超滤浓缩管哪家好
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通量(超滤效率)及其影响因素 超滤过程中需要在速率和回收率之间平衡以期获得比较好的效果。滤膜的 通量的定义是流量除以面积,使用高 NMWL 滤膜可以增加通量,但同时 会降低回收率。选择膜和装置时需要同时考虑截留分子量和通量。而参 与影响通量的因素很多,包括: 压力:较为稀释的蛋白溶液或胶体悬液进行超滤时,流量随着跨膜压力 (TMP)的增大而增加。正压条件下操作,如 Stirred Cell 搅拌式超滤杯, 这种因素影响较为明显。如果极化影响***,通量会达到一个平台,甚 至可能随着压力的增加而降低。普陀区默克2ml超滤浓缩管哪家好
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