扫描电镜超薄切片实际上是样品的二维切片,不能表达细胞的三维结构,而且在观察切片后所拍摄的显微照片时,容易造成错误的印象,用扫描电子显微镜( SEM )能直接观察标本表面的三维空间结构,真实地反映各种细胞表面和断裂面的形态特征,其照明源与透射电镜基本相同,由电子器经聚光镜汇聚成极细胞的电子探针,电子探针受扫描发生器控制,在样品表面逐点逐线的扫描,样品被电子轰击所产生的二次电子被收集、转换、放大,在电视荧光屏上同步扫描成像。二次电子的发射量与样品的表面形态有关,从而在荧光屏上出现表面起伏的样品立体图像。扫描电镜细胞样品的预处理包括取材、固定、脱水等。1940年英国剑桥大学初次试制成功扫描电镜。重庆专业的扫描电镜哪家效果好
扫描电镜由电子器发射出来的电子束,在加速电压的作用下,经过磁透镜系统汇聚,形成直径为5nm,经过二至三个电磁透镜所组成的电子光学系统,电子束会聚成一个细的电子束聚焦在样品表面。在末级透镜上边装有扫描线圈,在它的作用下使电子束在样品表面扫描。 由于高能电子束与样品物质的交互作用,结果产生了各种信息:二次电子、背反射电子、吸收电子、X射线、俄歇电子、阴极发光和透射电子等。这些信号被相应的接收器接收,经放大后送到显像管的栅极上,调制显像管的亮度。由于经过扫描线圈上的电流是与显像管相应的亮度一一对应,也就是说,电子束打到样品上一点时,在显像管荧光屏上就出现一个亮点。 扫描电镜就是这样采用逐点成像的方法,把样品表面不同的特征,按顺序,成比例地转换为视频信号,完成一帧图像,从而使我们在荧光屏上观察到样品表面的各种特征图像。江苏专门做扫描电镜哪家效果好英瀚斯生物扫描电镜可检测 高分子材料、精细化工、生物化学、药物化学等有机化合物结构分析 面向学科。
扫描电镜检测块状试样制备 导电性材料:主要是指金属,一些矿物和半导体材料也具有一定的导电性。这类材料的试样制备较为为简单。只要使试样大小不得超过仪器规定(如试样直径较为大为φ25mm,较为厚不超过20mm等),然后用双面胶带粘在载物盘,再用导电银浆连通试样与载物盘(以确保导电良好),等银浆干了(一般用台灯近距离照射10分钟,如果银浆没干透的话,在蒸金抽真空时将会不断挥发出气体,使得抽真空过程变慢)之后就可放到扫描电镜中直接进行观察。 非导电性材料:试样的制备也比较简单,基本可以像导电性块状材料试样的制备一样,但是要注意的是在涂导电银浆的时候一定要从载物盘一直连到块状材料试样的上表面,因为观察时候电子束是直接照射在试样的上表面的。
扫描电镜操作基本步骤 1 、取材 扫描电镜下观察的样品尺寸要求比较宽松,一般1cm3左右样品都能适合大多数扫描电镜观察。 2 、固定 铺片培养的细胞取出浸入 PBS 中,漂洗细胞表面。然后将细胞铺片放入青霉素小瓶中,加 4 ℃ 预冷的 3% 戊二醛,在 4 ℃ 固定 2h 或过夜,吸出固定剂,用 PBS 浸洗 2 次,每次 10min ,再用 4 ℃ 预冷的 1% 锇酸。在 4 ℃ 固定 1h ,然后用 PBS 浸洗 2 次,每次 10min 。 3 、脱水 acetone / 醋酸异戊酯( 1 : 1 )脱水 10min ,接下来醋酸异戊酯脱水 30min ,或用系列梯度酒精( 30% 、 50% 、 70% 、 80% 、 90% 、 95% 、 100% )脱水,每种浓度酒精通过 2 次,每次 15min 。 英瀚斯提供场发射扫描电子显微镜 ,配备高亮度肖特基场发射灯丝,可以获得高分辨率和低噪声成像效果。
分辨能力是扫描电镜SEM较为重要的性能指标,目前,钨灯丝SEM二次电子像的分辨率为3nm~6nm,但是,这不是日常工作能实现的,只是验收指标,它与观察条件、图象的亮度、对比度、信噪比有关。 钨灯丝SEM在日常工作条件下,用普通试样照相,能作到6nm分辨率就相当不易了。在此分辨率下,可以在5万倍以上拍出清晰照片。通常情况下,用3万倍对普通样品照相(如陶瓷、矿物),能给出清晰二次电子照片,就属高水平。 当研究某个样品,确定它的形貌特征时,要根据工作要求、它的表面特征和实际的预观察结果,选择适宜的放大倍数照相,不是放大倍数越大越好。在几万倍放大倍数下,很多样品表面缺乏细微形貌,难以得到清晰照片。高放大倍数时,取样面积很小,*为试样表面的很小一部分,缺乏代表性。扫描电镜能同时分析形貌和成分,可用于形貌观察、显微结构分析、微区成分分析、断口形貌和成分分布分析等。内蒙古哪家做扫描电镜服务
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扫描电镜观察生物试样。因电子照射而发生试样的损伤和污染程度很小。同其他方式的电子显微镜比较,因为观察时所用的电子探针电流小(一般约为10- 10~10- 12A)电子探针的束斑尺寸小(通常是5 nm到几十纳米),电子探针的能量也比较小(加速电压可以小到2 kV),而且不是固定一点照射试样,而是以光栅状扫描方式照射试样,因此,由于电子照射而发生试样的损伤和污染程度很小,这一点对观察一些生物试样特别重要。扫描式电子显微镜(SEM)中的电子束尽量聚焦在样本的一小块地方,然后一行一行地扫描样本。入射的电子导致样本表面散发出电子,显微镜观察的是这些每个点散射出来的电子。由于这样的显微镜中电子不必透射样本,因此其电子加速的电压不必非常高。场发射扫描电子显微镜是一种比较简单的电子显微镜,它观察样本上因强电场导致的场发射所散发出来的电子。重庆专业的扫描电镜哪家效果好
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