SEM扫描电镜样品的制备过程如下:①取材 根据需要,切取适当大小的样品。专门的SEM备有灵活可动,范围较大的样品台,样品可大些。装在透射电镜上的扫描附件,活动范围较小,样品直径应在3~4mm左右。②漂洗 用缓冲液把组织表面洗净,否则会影响正常形态,但以快速和轻巧为宜,尽量保护组织或组织的表面结构,使其不致因不慎的操作造成人为损伤。③固定 用25~5%戊二醛固定30分钟或更长时间。Boyde建议用戊二醛固定几天到几个月,这样会增加组织的韧性,减少脱水造成的萎缩。④漂洗 用缓冲液洗3次,洗去未结合的戊二醛。⑤重固定 1%锇酸固定1~2小时。⑥漂洗 用缓冲液洗去未结合的锇酸。⑦脱水 用30%、50%、70%、80%、90%、95%、100%、100%acetone或乙醇溶液各10分钟,大于1mm的样品可脱水10~20分钟。⑧干燥 一般情况下,可把脱水后的样品放在空气中自然干燥或45℃热风吹干。有些研究工作要求尽量完好保存样品表面的精细结构,可用真空干燥法、冷冻干燥法和临界点干燥法等使样品干燥。这些方法都比空气干燥法效果好,其中临界点干燥法优点多,多被研究工作者采用。 英瀚斯专业扫描电镜仪器使用平台!宁夏组织扫描电镜公司
扫描电镜以观察样品的表面形态为主。扫描电镜样品的制备,必须满足以下要求: ①保持完好的组织和细胞形态; ②充分暴露欲观察的部位; ③良好的导电性和较高的二次电子产额; ④保持充分干燥的状态。 某些含水量低且不易变形的生物材料,可以不经固定和干燥而在较低加速电压下直接观察,如动物毛发、昆虫、植物种子、花粉等,但图像质量差,而且观察和拍摄照片时须尽可能迅速。对大多数的生物材料,则应首先采用化学或物理方法固定、脱水和干燥,然后喷镀碳与金属以提高材料的导电性和二次电子产额。扫描电镜生物样品制备技术 常规扫描电镜对样品要求:必须是干燥的,不含水分或挥发性物质;具有一定机械强度,能耐受电子束轰击;具有导电性,被激发时能够产生足够的二次电子。生物材料特点:含水分多,质地柔软,机械强度小;组成元素的原子序数低,导电性差,激发后二次电子的产额较少。制样的任务:通过一系列处理,既要尽量完美地保存材料的固有形态,又要改良其物理性能,使其适合在电镜下观察成像 以下即为步骤方法、所需注意项目、以及操作中的使用技巧。广东哪家做扫描电镜推荐扫描电镜可动范围大,这对观察不规则形状试样的各个区域细节带来极大的方便。
扫描电镜离子溅射镀膜法 在低真空(0.1~0.01托)状态下,在阳极与阴极两个电极之间加上几百至上千伏的直流电压时,电极之间会产生辉光放电。在放电的过程中,气体分子被电离成带正电的阳离子和带负电的电子,并在电场的作用下,阳离子被加速跑向阴极,而电子被加速跑向阳极。如果阴极用金属作为电极(常称靶极),那么在阳离子冲击其表面时,就会将其表面的金属粒子打出,这种现象称为溅射。此时被溅射的金属粒子是中性,即不受电场的作用,而靠重力作用下落。如果将样品置于下面,被溅射的金属粒子就会落到样品表面,形 成一层金属膜,用这种方法给样品表面镀膜,称为离子溅射镀膜法。 和真空镀膜法比较,离子溅射镀膜法具有以下优点:(1)由于从阴极上飞溅出来的金属粒子的方向是不一致的,因而金属粒子能够进入到样品表面的缝隙和凹陷处,使样品表面均匀地镀上一层金属膜,对于表面凹凸不平的样品,也能形成很好的金属膜,且颗粒较细。(2)受辐射热影响较小,对样品的损伤小。(3)消耗金属少。(4)所需真空度低,节省时间。
扫描电镜由电子器发射出来的电子束,在加速电压的作用下,经过磁透镜系统汇聚,形成直径为5nm,经过二至三个电磁透镜所组成的电子光学系统,电子束会聚成一个细的电子束聚焦在样品表面。在末级透镜上边装有扫描线圈,在它的作用下使电子束在样品表面扫描。 由于高能电子束与样品物质的交互作用,结果产生了各种信息:二次电子、背反射电子、吸收电子、X射线、俄歇电子、阴极发光和透射电子等。这些信号被相应的接收器接收,经放大后送到显像管的栅极上,调制显像管的亮度。由于经过扫描线圈上的电流是与显像管相应的亮度一一对应,也就是说,电子束打到样品上一点时,在显像管荧光屏上就出现一个亮点。 扫描电镜就是这样采用逐点成像的方法,把样品表面不同的特征,按顺序,成比例地转换为视频信号,完成一帧图像,从而使我们在荧光屏上观察到样品表面的各种特征图像。1970年他发表了用扫描透射电镜拍摄的铀中的铀原子和钍原子像,这使SEM又进展到一个新的领域。
扫描电镜样本临界点干燥法 临界点干燥法是利用物质在临界状态时,其表面张力等于零的特性,使样品的液体完全汽化,并以气体方式排掉,来达到完全干燥的目的。这样就可以避免表面张力的影响,较好地保存样品的微细结构。此法操作较为方便,所用的时间也不算长,一般约2~3小时即可完成,所以是较为为常用的干燥方法。但用此法, 需要特殊仪器设备。临界点干燥是在临界点干燥仪中进行的,操作步骤如下: a.固定、脱水:按常规方法进行。如样品是用乙醇脱水的,在脱水至100%后,要用纯acetone置换15~20分钟。 b.转入中间液:由纯acetone转入中间液醋酸异戊酯中,时间约15~30分钟。 c.移至样品室:将样品从醋酸异戊酯中取出,放入样品盒,然后移至临界点干燥仪的样品室内,盖上盖并拧紧以防漏气。 d.用液体二氧化碳置换醋酸异戊酯:在达到临界状态(31℃, 72.8大气压)后,将温度再升高10℃,使液体二氧化碳气化,然后打开放气阀门,逐渐排出气体,样品即完全干燥。 扫描电子显微镜类型多样, 不同类型的扫描电子显微镜存在性能上的差异。江苏专门做扫描电镜哪家好
扫描电镜生物样品:蛋白、细胞及DNA等样品,请提供详细的制样过程,减少盐对测试结果的影响。宁夏组织扫描电镜公司
由于扫描电子显微镜具有上述特点和功能,所以越来越受到科研人员的重视,用途日益普遍。扫描电子显微镜已普遍用于材料科学(金属材料、非金属材料、纳米材料)、冶金、生物学、医学、半导体材料与器件、地质勘探、病虫害的防治、灾害(火灾、失效分析)鉴定、刑事侦察、宝石鉴定、工业生产中的产品质量鉴定及生产工艺控制等。在电子扫描中,把电子束从左到右方向的扫描运动叫做行扫描或称作水平扫描,把电子束从上到下方向的扫描运动叫做帧扫描或称作垂直扫描。两者的扫描速度完全不同,行扫描的速度比帧扫描的速度快,对于1000条线的扫描图象来说,速度比为1000。宁夏组织扫描电镜公司
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