扫描电镜(SEM)具有分辨率高和景深长等特点,因此图像层次丰富,立体感强,能够显示细胞和组织的三维结构形貌(图12-13),因此普遍应用于生物样品表面及其断面微细结构的观察。 自1966年首先台商品SEM诞生以来,发展一直很快,仪器本身性能如分辨率和多功能等不断提高外,样品制备技术也不断地改进和完善。样品制备的质量是直接决定SEM能否发挥较为佳性能,并拍出理想图片的关键所在。考虑到生物样品质地柔软、容易变形、导电性差、二次电子发射率低以及含水量多等特点,在制备SEM样品时,必须掌握以下原则: (1)每一操作过程,都应注意防止样品的污染和损伤,使被观察的样品尽可能保持原有的外貌和微细结构; (2)去除样品内水份,以利于维持SEM的真空度和防止镜筒的污染。但在脱水和干燥处理时,要尽量减少避免样品体积变小和收缩变形等人工损伤; (3)降低样品表面的电阻率,增加样品的导电性能,以提高二次电子发射率,建立适度的反差和减少样品的充放电效应; (4)观察组织细胞的表面或内部微结构,应注意和保护样品的观察面。 扫描电镜生物样品:蛋白、细胞及DNA等样品,请提供详细的制样过程,减少盐对测试结果的影响。山西推荐的扫描电镜推荐
1)植物学 科学界用扫描电镜对植物的根、茎、叶等组织进行解剖学研究,并且能够对细胞核、叶绿体等微小的细胞结构进行动态观察,从超微形态学角度阐明了叶片衰老时细胞 核、叶绿体的动态变化特征,研究叶片衰老机理和规律,可用于延缓小麦等植物叶片衰老。 2)动物学 应用扫描电镜技术研究动物的超微形态结构,对其分类学、生理学,病理学等基础学科以及资源利用、动植物虫害防治等具有重要意义。比如,应用扫描电镜研究各种 动物毛纤维的形态,如鳞片的形状,高度,厚度、排列规律边缘形态,表面光滑程度、张角大小,覆盖密度等指标,可以用于进出口织品质量的鉴定、纺织晶加工工艺 的改进、原料的合理利用、动物种属的鉴别、刑事破等方面。浙江整体扫描电镜公司扫描电子显微镜在其微观结构分析研究方面同样显示出极大的优势。
扫描电镜照片是灰度图像,分为二次电子像和背散射电子像,主要用于表面微观形貌观察或者表面元素分布观察。 一般二次电子像主要反映样品表面微观形貌,基本和自然光反映的形貌一致,特殊情况需要对比分析。 背散射电子像主要反映样品表面元素分布情况,越亮的区域,原子序数越高。 2、看表面形貌,电子成像,亮的区域高,暗的区域低。非常薄的薄膜,背散射电子会造成假像。导电性差时,电子积聚也会造成假像。扫描电镜是一种多功能的仪器,具有制样简单、放大倍数可调范围宽、图像的分辨率高、景深大等特点。数十年来,扫描电镜已普遍地应用在生物学、医学、冶金学等学科的领域中。它可以观察纳米粒子的形貌、在基体中的分散情况以及粒径的测量、材料断口分析、镀层表面形貌分析和深度检测、微区化学成分分析及显微组织及超微尺寸材料的研究等分析应用。
扫描电镜样本干燥 以临界干燥法较为理想,但必须要有专门的仪器临界点干燥器。当实验室不具备此种仪器时,可采用冰冻干燥法和乙腈干燥法。乙腈干燥法的关键是乙腈置换。样品经上述处理后,浸入 520% 的乙腈溶液中,然后依次更换 70% 、 80% 、 90% 、 95% 、 100% 的乙腈溶液,每次浸泡 15-20min ,较为后再换 100% 乙腈。然后进行真空干燥。即将乙腈置换后的样品连同青霉素瓶一起放到真空镀膜台的真空装置内,抽低真空,一般需 30-50min 。样品干燥后,待其温度升至室温时再放气,取出样品。 使用扫描电镜观察细胞样品的制备方法 5 、样品导电处理 用真空喷镀法。所用的仪器为真空喷镀仪,样品被安置在离蒸发源约 10-15cm 处的样品台上,样品进行旋转活动,先喷碳。后喷金,喷镀应均匀,完成后镜下观察。 扫描电镜观察厚试样:其在观察厚试样时,能得到高的分辨率和比较真实的形貌。
分辨能力是扫描电镜SEM较为重要的性能指标,目前,钨灯丝SEM二次电子像的分辨率为3nm~6nm,但是,这不是日常工作能实现的,只是验收指标,它与观察条件、图象的亮度、对比度、信噪比有关。 钨灯丝SEM在日常工作条件下,用普通试样照相,能作到6nm分辨率就相当不易了。在此分辨率下,可以在5万倍以上拍出清晰照片。通常情况下,用3万倍对普通样品照相(如陶瓷、矿物),能给出清晰二次电子照片,就属高水平。 当研究某个样品,确定它的形貌特征时,要根据工作要求、它的表面特征和实际的预观察结果,选择适宜的放大倍数照相,不是放大倍数越大越好。在几万倍放大倍数下,很多样品表面缺乏细微形貌,难以得到清晰照片。高放大倍数时,取样面积很小,*为试样表面的很小一部分,缺乏代表性。英瀚斯专业扫描电镜仪器使用平台!江西整体扫描电镜公司
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扫描电镜细胞内部结构冷冻割断法 该方法简便,结构清晰,已得到普遍应用。其操作方法如下: 1) 取材和固定:为了使细胞结构清晰,不被过多的血细胞污染,可在取材前用灌注法冲洗。即先将动物麻醉,经腹主动脉注入生理盐水或低分子量的右,切开下腔静脉放血,至无血色为止。然后迅速取材,将样品修成1mm×1mm×5mm大小,投入1%锇酸溶液中固定1小时,用1/15M磷酸缓冲液(pH7.4)清洗两次,每次10分钟。 2) 二甲基亚砜浸泡:将样品依次放入25%、50%二甲基亚砜溶液中,各浸泡30分钟。 3) 割断:用TF—1型冷冻割断装置进行割断。然后将割断后的样品放到50%二甲基亚砜中,等融化后再用1/15M磷酸缓冲液浸洗,每次10分钟,换液5次。 4) 软化及后固定:将样品放入0.1%锇酸中软化,温度20℃,时间48~72小时。然后用1%锇酸固定1小时,双蒸水浸洗1小时,换液几次,需彻底清洗干净。 5) 导电染色:将样品放入2%丹宁酸中2小时(或过夜),以双蒸水清洗1小时,换液几次。双蒸水清洗1小时。 6) 脱水、干燥及镀膜:按常规方法进行。山西推荐的扫描电镜推荐
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