我们展示了使用两种蛋白作为底物的OmniGLYZOR的性能。依那西普是一种 Fc 融合蛋白，含有 TNFα 受体的胞外结构域。该结构域用 2 个 N-糖和 8-11 个 1 个具有不同程度唾液酸化的 O-聚糖修饰。在 37°C 下将这种重糖基化蛋白在 OmniGLYZOR Microspin 柱上孵育 1 小时，可完全去除所有 N-和 O-糖，如中级 LC-MS 分析所示。促红xibao生成素 （EPO） 是一种携带 3 个 N-聚糖和 1 个he心 1 个 O-聚糖的小蛋白质，其总质量的近 40% 由聚糖组成。O-连接聚糖通常存在于蛋白质的暴露位置，因为它们在蛋白质折叠发生后附着。只有负责其合成的糖基转移酶才能接触到这些暴露的位点。GalNAcEXO 在 pH 值 6.0 至 7.6 范围内具有高度活性，来源于Akkermansia muciniphila。辽宁瑞典GenovisPNGaseF去糖基化酶生物药物开发
Genvois的SialEXO产品是唾液酸酶，用于N-和O-糖基化蛋白的有效去唾液酸化。SialEXO冻干由两种唾液酸酶组成，每种唾液酸酶都具有独特的活性，并且它们同时起作用。一种酶对α2-3、α2-6和α2-8连接的唾液酸具有很好的活性，另一种酶（SialEXO 2-3）通过α2-3-键快速水解唾液酸。SialEXO冻干可在2小时内去除天然蛋白质上的所有唾液酸。SialEXO在天然条件下水解糖蛋白，在pH值范围为6.5至9时显示出活性。这些酶来源于Akkermansia muciniphila，并在大肠杆菌中表达。两种酶都含有 His 标签，酶的分子量为 43 kDa 和 66 kDa。 湖北固定化小柱形式PNGaseF去糖基化酶疾病机理研究FucosEXO固定化离心柱含有与琼脂糖珠共价偶联的FucosEXO酶；
用于离心柱中糖蛋白去胶基化的固定化酶。Genovis的FucosEXO固定化离心柱含有与琼脂糖珠共价偶联的FucosEXO酶，用于糖蛋白的去氟糖基化，而不会用酶污染z终制剂。Microspin 色谱柱可用于 5 或 10 x 0.5 mg 糖蛋白的去胶基化。1. 易于使用的离心柱；2. 提高酶与底物的比例，提高消化效率；3. z终样品中不含酶。有效去除α1-2,3,4连接岩藻糖：分析用复杂聚糖结构修饰的糖蛋白可能具有挑战性，需要高效和特异性的酶学工具。Genovis的FucosEXO 是 α-岩藻糖苷酶的混合物，用于有效水解 N-和 O-糖蛋白或寡糖上的 α1-2、α1-3 和 α1-4 连接的岩藻糖残基，无需辅助因子或添加
在Genovis的PNGaseF去除N-聚糖并用SialEXO和GalactEXO截断O-聚糖后，在质谱图中观察到几个与GalNAcs相关的峰。为了去除剩余的GalNAc残基，应用GalNAcEXO酶。用GalNAcEXO处理后观察到的单个蛋白峰显示完全去除剩余的GalNAcs。 GalNAcEXO在生理缓冲液和中性pH值中具有活性，使其与大多数样品相容。此外，GalNAcEXO的活性不依赖于任何可能影响LC-MS分析的辅因子，如BSA。根据底物的性质，糖蛋白的GalNAcEXO反应在2小时内完成，而更复杂的样品可能需要孵育过夜。Genovis的GalNAcEXO也可固定在离心柱中，以便快速方便地处理样品，在制备过程中不会残留酶。OglyZOR 是一种内切糖苷酶，可特异性水解天然糖蛋白上的he心 1 O-聚糖；
OglyZOR 来源于口腔链球菌，在大肠杆菌中表达。该酶含有 His 标签，分子量为 227 kDa。SialEXO来源于Akkermansia muciniphila，在大肠杆菌中表达。SialEXO酶含有His标签，组分的分子量分别为42 kDa和66 kDa。1.高效O-糖苷酶；2. 降低样品异质性，揭示潜在的关键蛋白质修饰；3. 完全、稳健地去除 O-糖he心 1 二糖。Genovis的冻干酶，用于水解糖蛋白上的he心1 O-聚糖。OglyZOR 冻干剂以冻干粉的形式提供，装在 2000 个单位的小瓶中，用于在 2 mg 糖蛋白上水解he心 1 O-聚糖。它需要去除唾液酸助剂才能发挥作用，因此与2000单位的SialEXO冻干一起提供。融合蛋白和其他糖基化蛋白上的 N 和简单的粘蛋白型 O-聚糖。安徽PNGaseF去糖基化酶瑞典Genovis
用SialEXO对依那西普糖蛋白去唾液酸化，并用ProteinSimple成像等电聚焦分析。辽宁瑞典GenovisPNGaseF去糖基化酶生物药物开发
ImpaRATOR 是一种 O-聚糖依赖性蛋白酶，可催化糖蛋白和糖肽中与糖基化丝氨酸或苏氨酸残基相邻的肽键的水解。它切割用粘蛋白型O-聚糖修饰的丝氨酸或苏氨酸残基的N-末端，包括唾液酸化物种。粘蛋白型O-聚糖是ImpaRAT活性所必需的，该酶不会消化未修饰的丝氨酸或苏氨酸残基，也不会在糖蛋白的N-糖基化位点。该酶接受 O-聚糖结构，包括唾液酸化he心 1 和he心 2 结构以及 Tn 抗原。Genovis的ImpaRATOR 来源于铜绿假单胞菌，在大肠杆菌中表达。该酶含有 His 标签，分子量为 97 kDa。辽宁瑞典GenovisPNGaseF去糖基化酶生物药物开发
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