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PNGaseF去糖基化酶基本参数
  • 品牌
  • Genovis
  • 型号
  • L1-F02-025
PNGaseF去糖基化酶企业商机

经过多年的经验积累及市场积淀,倍笃生物已组合多条不同产品线,分别满足体外诊断、organoid及干细胞、细胞基因药物等领域的需求。其中,细胞基因药物领域产品线包含SAN HQ高盐核酸酶及M-SAN HQ中盐核酸酶、泊洛沙姆P 188 Bio、GMP级MSC/PSC培养基、GMP级胶原酶、AAV滴度检测产品、工艺杂质及外源污染物残留检测产品、聚糖分析用酶、ADC偶联技术、QED抗体对、AAV中和抗体、蛋白酶等;相关品牌有挪威ArcticZymes Technologies、德国BASF、德国Sartorius、德国Nordmark、瑞典Genovis、美国QED、中国君研生物等。融合蛋白和其他糖基化蛋白上的 N 和简单的粘蛋白型 O-聚糖。重庆PNGaseF去糖基化酶瑞典Genovis

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Genovis的SialEXO Immobilized是一种微离心柱,用于在室温下孵育30分钟后完全去除0.5mg天然糖蛋白上的唾液酸。为了研究依那西普的潜在电荷变体,开发了一种使用SialEXO固定化柱对糖蛋白进行去唾液酸化的一般工作流程。毛细管电泳通常用于在生物制剂的表征和质量控制过程中确定电荷变体。使用SialEXO Imfixedized对糖蛋白进行去唾液酸化,并使用ProteinSimple的Maurice在成像等电聚焦中进行分析。综合起来,该分析工作流程改进了糖蛋白的分离并实现了电荷异构体分析。依那西普,如果不首先去除唾液酸,将很难分析,但使用SialEXO固定化分离峰可以获得。四川PNGaseF去糖基化酶瑞典GenovisOpeRATOR用于质谱法进行O-糖分析、O-糖肽图谱以及中级分析,消化发生在O-糖基化位点的N端。

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当在完整状态下进行分析时,EPO的聚糖异质性导致了非常复杂的质谱图。通过在 37°C 下在 OmniGLYZOR Microspin 柱上孵育 1 小时,可以有效地去除 N 糖(含有PNGase F酶)和 O-糖,如对应于未修饰蛋白质的单个峰所示。EPO上残留了少量用乙酰化唾液酸修饰的O-聚糖,因为OmniGLYZOR对这种结构的水解效率低下。根据制造商Genvois的建议(在37°C下进行O/N孵育),两种底物蛋白也用另一种市售的去糖基化产物处理,并显示数据以供比较。另一方面,N-聚糖在内质网中翻译地连接到未折叠的蛋白质上。这导致某些 N-糖基化位点难以被 Genovis的PNGase F 接近,或者一旦底物蛋白折叠成其天然状态,就根本无法接近。因此,这种N-聚糖的水解需要底物蛋白以与酶活性相容的方式变性。

Fc N-聚糖在抗体的效应功能中起着至关重要的作用,但可能会增加蛋白质表征测定的复杂性。在天然条件下用PNGase F去除Fc N-糖可以表征游离N-糖以及去糖基化抗体的功能和结构。 为了证明PNGase F固定化和PNGase F冻干在天然反应条件下有效去除Fc N-聚糖,对zhiliao性抗体曲妥珠单抗进行了处理。图2中的质量数偏移表明,在37°C下用Genovis的PNGase F冻干或PNGase F固定化孵育1小时后,曲妥珠单抗上的Fc N-聚糖成功去除,与在溶液中用PNGase F冻干处理的样品相比,没有酶干扰用PNGase F固定处理的样品的分析。GalactEXO 冻干剂以冻干粉的形式提供,装在 2000 单位小瓶中,用于在 2 mg 糖蛋白上水解 β1-3,4-连接的半乳糖。

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在Genovis的PNGaseF去除N-聚糖并用SialEXO和GalactEXO截断O-聚糖后,在质谱图中观察到几个与GalNAcs相关的峰。为了去除剩余的GalNAc残基,应用GalNAcEXO酶。用GalNAcEXO处理后观察到的单个蛋白峰显示完全去除剩余的GalNAcs。 GalNAcEXO在生理缓冲液和中性pH值中具有活性,使其与大多数样品相容。此外,GalNAcEXO的活性不依赖于任何可能影响LC-MS分析的辅因子,如BSA。根据底物的性质,糖蛋白的GalNAcEXO反应在2小时内完成,而更复杂的样品可能需要孵育过夜。Genovis的GalNAcEXO也可固定在离心柱中,以便快速方便地处理样品,在制备过程中不会残留酶。将肽和SialEXO的混合物加载到GlycOCATCH树脂上,离心洗涤洗脱和富集O-糖基化肽。天津PNGaseF去糖基化酶

OmniGLYZOR 水解 N-和粘蛋白型 O-聚糖。重庆PNGaseF去糖基化酶瑞典Genovis

上海倍笃生物科技有限公司(简称“倍笃生物”),由中国科学院及生物医药产业界人士,于2018年1月共同创立。公司代理多个品牌的仪器、试剂及耗材(如Genovis的IdeS酶),遵守相关法规要求,如cGMP规范、ISO13485质量管理体系认证等,致力于为诊断领域如分子诊断及病原微生物检测研发等,药物研发领域如细胞基因药物、核酸药物、抗体药物、干细胞及外泌体研究等客户提供合规、高质量物料及专业服务,以期与客户共同协作,加快研发及生产进度,为客户提供更多价值。重庆PNGaseF去糖基化酶瑞典Genovis

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