相对定量可分析某一靶基因在不同样品之间、同一样
品的不同部位之间以及某一样品的某一部位在不同动态时
期之间的 mRNA 水平上表达量的比值，也可分析靶基因与
内参基因在同一样品中拷贝数的比值。在相对定量中，需要
用内参基因来消除因模板浓度不同所带来的误差，进而对
靶基因的初始量进行校正。常用的有 2-ΔΔCT 法，双标准曲
线法。2-ΔΔCT 法不需要生成标准曲线，操作简便、效率 高，但 靶 基 因
以及内参基因的扩增效率需达较高。此方法通常用于某一
基因在 mRNA 水平上的表达量分析。 多种qPCR总有一款是您满意。海南相对定量qPCR机构哪家好
Absolute Quantification法也称作标准曲线法，是一种利用已知的标
准曲线来定量未知样本目的模板起始量的方法。以 5 点梯
度稀释所得的标准品为模板，经实时荧光定量 PCR 扩增，以
目的模板初始拷贝数的对数为横坐标，检测到的 CT 值为纵
坐标绘制标准曲线，得到线性回归方程，将未知样本的 CT
值带入该方程即可计算出目的模板的起始量。标准曲线的各
项指标：斜率、扩增效率（E）、相关系数（R2
）、间距均需进行
严格评价，从而确保该曲线的可用性。 广东TaqMan荧光探针qPCR哪里有上海融享生物科技有限公司主营项目很多，其中qPCR销很好。
在荧光定量 PCR 中，对整个 PCR 反 应扩增过程进行实时监测和连续分析荧光信号，随着
反应时间的延续，监测到的荧光信号可以绘制成一条 曲线。在 PCR 反应早期，产生荧光的水平不能与背 景明显区别，而后荧光的产生进入指数期、线性期和 平台期，在 PCR 反应处于指数期的某一点检 测 PCR 产物的量，并由此可以推断模板初始的含
量。为了准确判断样品中某基因产物的起始拷贝 数，荧光定量 PCR 采用参数“Ct”值，Ct 值 ( cycle threshold) 是指每个反应管内的荧光信号到达设定的
阈值时所经历的循环数
在常规 PCR 基础上添加了荧光染料或荧光探 针 。而用于常规 PCR 的专门热循环仪配备荧光检 测模块 ,可监测扩增时的荧光 。荧光染料能特异性 掺入 DNA 双链, 发出荧光信号, 而不掺入双链中的 染料分子不发出荧光信号 , 从而保证荧光信号的增 加与 PCR 产物增加完全同步 。荧光探针法是指当 标记在探针的 5 ′端荧光报告基团 (reporter R )未被 标记在3 ′端淬灭基团 (quencher Q )影响时, 可检测 到报告基团的荧光信号 。检测到的荧光信号的强度 与 PCR 反应产物的量成正相关,即每扩增一条 DNA 链, 就有一个荧光分子形成, 实现了荧光信号的累积 与 PCR 产物的形成完全同步 。您了解qPCR的优势吗？
实时荧光定量 PCR(real-time quantitative
polymerase chain reaction，real-time Q-PCR)技术于
1996 年由美国 Applied Biosystems 公司推出，由于该
技术不仅实现了 PCR 从定性到定量的飞跃，而且与常
规 PCR 相比，它具有特异性更强、灵敏度高、重复性
好、定量准确、自动化程度高、全封闭反应等优点成为
分子生物学研究中的重要工具，目前已得到多应用[1]。
实时荧光定量 PCR 的应用范围非常多，包括 mRNA
表达的研究、DNA 拷贝数的检测、单核苷酸多态性的测
定等[2]。它能对结核分枝杆菌、乙型、丙型肝炎、爱滋
病、淋球菌、沙眼衣原体等病原体进行准确的定量
检测。其定量范围极宽，无需做梯度稀释，特异性更强，
克服了假阳性。 上海融享生物科技有限公司作为上海一家专业的qPCR公司。天津SYBRGreen法qPCR公司
qPCR的好处您了解吗？海南相对定量qPCR机构哪家好
与传统的 PCR 技
术相比，Real-time Q-PCR 的不足之处是：①由于运用
了封闭的检测，减少了扩增后电泳的检测步骤，因此也
就不能监测扩增产物的大小。②因为荧光素种类以及检
测光源的局限性，从而相对地限制了 real-time Q-PCR
的复合式检测的应用能力。③目前 real-time Q-PCR 实
验成本比较高，从而也限制了其的应用
随着技术不断改进和发展，目前 real-time Q-PCR 已
成为科研的主要工具，该技术未来的应用前景是令人鼓舞
的，一方面 real-time Q-PCR 技术与其他分子生物学技术
相结合使定量极微量的基因表达或 DNA 拷贝数成为可
能。另一方面荧光标记核酸化学技术和寡核苷酸探针杂交
术的发展以及 real-time Q- PCR 技术的应用，使定量
PCR 技术有一个足够的基础为广大临床诊断实验室所接
受，将有助于临床医生对疾病的诊断和 海南相对定量qPCR机构哪家好
