物质所具有的抗原性主要由分布在抗原表面的抗原决定簇决定。固定液的固定对免疫组化的正确结果极其重要,此液能使抗原保存良好。抗原修复的好坏直接影响着免疫组化检测结果的可靠性。在进行免疫组化时并非所有的抗原都要进行抗原修复,抗原性保存良好或基本保存者不需要修复。目前抗原修复的方法主要有蛋白酶消化法、硼氢化钠(NaBH4)修复法和热修复法。较常用的是热修复法,尤其是细胞核抗原经热修复后,其染色效果特别好。所以我们必须清楚影响抗原性的因素及各种抗原修复的方法,严格按照抗体说明书进行抗原修复。鉴于抗原修复时间的方法较多,在实际工作中,究竟选用何种抗原修复法,应根据抗原抗体种类予以选择,必要时可以多种方法同时使用,这样使其更具有针对性,标记结果更理想。免疫组化,HE染色,免疫荧光找上海融享生物。福建动物实验免疫组化检测机构
实验为例
从我接触的很多本科生和研究生中发现,他们的确是免疫组化“新手”,他们只注重如何做和较好终的结果,但对为什么这样做不太感兴趣。他们常按照网上所说的方法,摸索好的抗体浓度和条件后做出很漂亮的染色结果后,他们就认为自己已经掌握了免疫组化方法了,结果不求上进,更换一种新抗体后或实验出现异常结果后就很难做出来了。当然,免疫组化对于我来说,做过很多,但也不能说什么都会,只不过我做的多了,失败多了和思考多了,可能比新手多了解一些其中的诀窍,拿来与大家进行分享。此外,我个人经验不可能面面俱到,还需要更多有经验的高手一起分享、纠正和补充。在这里。
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酶消化法 常用的消化酶有胰蛋白酶、胃蛋白酶,应严格掌握好消化时间、温度和浓度。胰蛋白酶使用浓度为0.05%~0.1%,消化温度为37℃,消化时间为10~40**要用于细胞内抗原的显示:胃蛋白酶使用浓度为0.4%,消化温度为37℃,消化时间为30~180要用于细胞间质抗原的显示,如:Laminin(层粘蛋白),Collagen IV(IV型胶原蛋白)等。热修复法 现常用微波修复、高温高压修复、水浴加热修复法。较常用的修复法是pH6.0枸橼酸缓冲液。修复过程中的注意要点是:(1)达到规定的温度(92℃~95℃以上);(2)维持一定的时间,微波修复、水浴加热须控制在10~15min,高温高压修复须控制在2min左右;(3)避免切片干涸,如果切片干涸,抗原则可能完全丢失;(4)加热后必须经过室温自然冷却20~30min,使未折叠的蛋白分子链恢复天然构型。
根据标记物的不同,免疫细胞化学技术可分为免疫荧光细胞化学技术,免疫酶细胞化学技术,免疫铁蛋白技术,免疫金-银细胞化学技术,亲和免疫细胞化学技术,免疫电子显微镜技术等。近些年来,核酸分子原位杂交技术采用生物素、地高辛等非放射性物质标记探针,和免疫细胞化学技术密切结合,发展为杂交免疫细胞化学技术。不同的免疫细胞化学技术,各具有独特的试剂和方法,但其基本技术方法是相似的,都包括抗休的制备,组织材料的处理、免疫染色、对照试验、显微镜观察等步骤。还有双重和多重标记技术也有重要的用途。上海融享生物免疫朱短周期,服务优。
石蜡切片厚4~6μm,捞片于多聚赖氨酸防脱水剂中,60℃烘烤30min~60min,再脱蜡、脱水。这个处理过程的关键是要保证梯度二甲苯和酒精的浓度,使组织脱蜡、脱水干净彻底,否则,水洗后切片含有“油珠”,呈云雾状,冲洗不干净,致使抗体在组织上分布不均,导致染色效果不佳。我科的方法是:普通常规染色所用的梯度二甲苯和酒精与免疫组织化学染色所用的梯度二甲苯和酒精分开,并且定期更换液体。在二甲苯脱蜡时,二甲苯I和II脱蜡时间不少于半小时,梯度酒精各5min左右。如在室温较低时,应将梯度二甲苯放于恒温箱中提前预热,梯度酒精时间延长,保证组织的充分脱蜡脱水。免疫组化病理实验切片 染色等找融享生物 。内蒙古动物实验免疫组化检查机构
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意义编辑
近年来,随着免疫组织化学技术的发展和各种特异性抗体的出现,使许多疑难得到了明确诊断。在常规病理诊断中,5%-10%的病例单靠H.E.染色难以作出明确的形态学诊断。尤其是免疫组化在诊断和鉴别诊断中的实用价值受到了普遍的认可,其在低分化或未分化的鉴别诊断时,准确率可达50%-75%。免疫组织化学的临床应用主要包括以下几方面:
⑴恶性的诊断与鉴别诊断;
⑵确定转移性恶性的原发部位;
⑶对某类进行进一步的病理分型;
⑷软组织的一般需根据正确的组织学分类,因其种类多、组织形态相像,有时难以区分其组织来源,应用多种标志进行免疫组化研究对软组织的诊断是不可缺少的;
⑸发现微小转移灶,有助于临床方案的确定,包括手术范围的确定。
⑹为临床提供方案的选择。
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