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免疫组化基本参数
  • 品牌
  • 融享
  • 公司名称
  • 上海融享生物科技有限公司
  • 行业类型
  • 生物行业
  • 安全质量检测类型
  • 可靠性检测
  • 服务内容
  • 免疫组化
  • 所在地
  • 上海
  • 检测类型
  • 行业检测
  • 服务分类
  • HE染色
免疫组化企业商机

免疫组化镜检

在镜检前可以通过相关资料查询抗体的表达部位:细胞间质、细胞膜、细胞浆、核膜、细胞核以及在其中的多个部位表达(如:MPO抗体表达在细胞膜、细胞浆、核膜、细胞核上)和表达组织(如:VWF抗体在血管壁上表达,呈现环形)。

在显微镜下观察时,先在4倍镜下查找组织及其范围,然后查看整个组织确定阳性产物的表达部位,然后将阳性产物表达部位置于视野正**,换高倍镜观察。细胞凋亡检测

细胞凋亡原理:正常凋亡细胞通过检测凋亡细胞段进行染色,正常的、人为造成凋亡的细胞很少能够被染色。以甲基绿复染,便于从形态学上分辨评估正常细胞和凋亡细胞。

首先确定目标凋亡细胞的组织部位(如眼球组织,由于玻璃体结构内没有细胞核,因此看不到凋亡,在整个组织的较好外面有单层视网膜细胞,因此只能在较好边缘查看凋亡细胞的阳性产物)


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分类

1)按标记物质的种类,如荧光染料、放射性同位素、酶(主要有辣根过氧化物酶和碱性磷酸酶)、铁蛋白、胶体金等,可分为免疫荧光法、放射免疫法、免疫酶标法和免疫金银法等。

2)按染色步骤可分为直接法(又称一步法)和间接法(二步、三步或多步法)。与直接法相比,间接法的灵敏度提高了许多。

3)按结合方式可分为抗原-抗体结合,如过氧化物酶-抗过氧化物酶(***)法;亲和连接,如卵白素-生物素-过氧化物酶复合物(ABC)法、链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结(SP)法等,其中SP法是比较常用的方法;聚合物链接,如即用型二步法,此方法尤其适合于内源性生物素含量高的组织抗原检测。


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芯片与常规切片免疫组化标记的比较 常规制片免疫组化阴性,而组织芯片免疫组化阳性者包括ER2例,PR1例;常规制片免疫组化阳性,而组织芯片免疫组化阴性者包括nm23、Her-2各1例。而部分病例常规制片免疫组化和组织芯片免疫组化阳性表达强度略有不同。组织芯片的免疫组化结果与常规制片免疫组化比较,统计学处理差异无显现性。3.3 规格组织芯片免疫组化效果的比较 在本观察中,使用1.0mm大小的组织芯进行免疫组化染色所得的结果和使用0.5mm组织芯所得结果一致,表明组织芯大小并不影响实验结果,关键是在组织芯片制作过程中认真观察原始常规切片,选取表示性区域并准确标记,在受体蜡块相应位置采取组织芯块。在同样面积的芯片,可以排列较多数量的小尺寸组织芯块,较容易包含大量研究病例

色反应的控制  免疫酶染色应注意控制:①成色质浓度和温育时间可调节 ,增加成色质的量和/或增加底物温育时间,可增加反应产物强度。着色太深可减少温育反应时间。②过氧化物酶显色时,H2O2较大浓度将使显色反应过快而致背景加深;过量H2O2可能88酶的活性。


  4.复染  根据所用的染色方法和呈显颜色等,可选用适当的复染方法。如阳性结果呈红或棕色,则用苏木素将细胞核染成兰色,以便定位检测。也可用1%~2%甲基绿复染。


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    非特异性染色弥散性均匀)2.组织切片制作过程的影响①固定不良—非特异性染色,显示不均。②边缘干燥—非特异性染色(常见),加抗体时勿干片。3.人工假象与特异性结果显示不在同一平面上。阳性对照:用已知抗原阳性的切片与待检标本同时进行免疫细胞化学染色。对照切片呈阳性结果,标为阳性对照。阴性对照:用确证不含已知抗原的标本作对照,应呈阴性结果,称阴性对照。其实这只是阴性对照中的一种,阴性对照还应包括空白、替代、吸收和***实验。▲染色失败的几种原因:(1)所染的全部切片均为阴性结果,包括阳性对照在内。全部(-)原因可能:①染色未完全严格按照操作步骤进行;②漏加一种抗体,或抗体失效;③缓冲液内含叠氮化钠,***了酶的活性;④底物中所加H2O2量少或失效;⑤复染或脱水剂使用不当(2)所有切片均呈阳性反应,原因可能是:①切片在染色过程中抗体过浓,或干燥了。②缓冲液配置中未加氯化钠和PH值不准确,洗涤不彻底。③使用已变色的呈色底物溶液,或呈色反应时间过长。④抗体温育的时间过长。⑤H2O2浓度过高,呈色速度过快。粘附剂太厚。(3)所有切片背景过深,原因可能是:①未加酶消化处理切片。②切片或涂片过厚。③漂洗不够。有关免疫组化,HE染色,免疫荧光服务就找融享生物。浙江组织免疫组化检测哪里有

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固定若想得到理想的ICC染色结果、正确地判断抗原物质在组织细胞内的位置,除需有良好酶和抗体外,保持组织细胞内抗原物质的不动性(Immobility)和免疫活性也是至关重要的。换言之,如果抗原物质在组织细胞间弥散、丢失或失去免疫活性,无论如何努力染色都是徒劳的,所以说固定是ICC染色中非常重要的一环。ICC与其它组织学技术不同,除要求保存良好的结构外,还需保存组织抗原的免疫活性。一般认为,新鲜组织能够比较大限度地保存组织抗原的免疫活性,但结构较差,易出现抗原弥散丢失现象。Cumming(1980)报告,不固定的组织切片ICC染色时,环鸟苷酸含量丢失80%以上河北病理切片免疫组化检测机构

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