实验为例
从我接触的很多本科生和研究生中发现，他们的确是免疫组化“新手”，他们只注重如何做和较好终的结果，但对为什么这样做不太感兴趣。他们常按照网上所说的方法，摸索好的抗体浓度和条件后做出很漂亮的染色结果后，他们就认为自己已经掌握了免疫组化方法了，结果不求上进，更换一种新抗体后或实验出现异常结果后就很难做出来了。当然，免疫组化对于我来说，做过很多，但也不能说什么都会，只不过我做的多了，失败多了和思考多了，可能比新手多了解一些其中的诀窍，拿来与大家进行分享。此外，我个人经验不可能面面俱到，还需要更多有经验的高手一起分享、纠正和补充。在这里。
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免疫组化镜检
在镜检前可以通过相关资料查询抗体的表达部位：细胞间质、细胞膜、细胞浆、核膜、细胞核以及在其中的多个部位表达（如：MPO抗体表达在细胞膜、细胞浆、核膜、细胞核上）和表达组织（如：VWF抗体在血管壁上表达，呈现环形）。
在显微镜下观察时，先在4倍镜下查找组织及其范围，然后查看整个组织确定阳性产物的表达部位，然后将阳性产物表达部位置于视野正**，换高倍镜观察。细胞凋亡检测
细胞凋亡原理：正常凋亡细胞通过检测凋亡细胞DNDNA段进行染色，正常的、人为造成凋亡的细胞很少能够被染色。以甲基绿复染，便于从形态学上分辨评估正常细胞和凋亡细胞。
首先确定目标凋亡细胞的组织部位（如眼球组织，由于玻璃体结构内没有细胞核，因此看不到凋亡，在整个组织的较好外面有单层视网膜细胞，因此只能在较好边缘查看凋亡细胞的阳性产物）
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目的 比较抗原修复对多聚甲醛固定脑组织冰冻切片免疫组化结果的影响。 方法 成年SD大鼠用4%多聚甲醛经心腔灌注、固定后，分别经15%及30%蔗糖梯度脱水后进行冰冻切片（10μm），取相同部位切片20张，用兔抗Ach-M 2 受体多克隆抗体和小鼠抗DA-D 2 受体多克隆抗体作S-P免疫组化染色。 结果 经抗原修复的冰冻切片组的阳性结果比未经抗原修复组有明显提高。 结论 本实验次发现多聚甲醛固定的组织冰冻切片经抗原修复可以提高免疫反应敏感性或提升抗体效价。机制可能与多聚甲醛固定后对抗原有封闭作用有关。
色反应的控制 免疫酶染色应注意控制：①成色质浓度和温育时间可调节 ，增加成色质的量和/或增加底物温育时间，可增加反应产物强度。着色太深可减少温育反应时间。②过氧化物酶显色时，H2O2较大浓度将使显色反应过快而致背景加深；过量H2O2可能88酶的活性。
4．复染 根据所用的染色方法和呈显颜色等，可选用适当的复染方法。如阳性结果呈红或棕色，则用苏木素将细胞核染成兰色，以便定位检测。也可用1%～2%甲基绿复染。
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减少或消除非特异性染色的方法 组织中非抗原抗体反应出现的阳性染色称为非特异性背景染色，较好常见的原因是蛋白吸附于高电荷的胶元和结缔组织成分上。有效方法是在用首先抗体前加制备第二抗体动物之非免疫血清（1：5-1：20）封闭组织上带电荷基团而除去与首先抗体非特异性结合。必要时可加入2%-5%牛血清白蛋白，可进一步减少非特异性染色。作用时间为10-20min。也可用除制备首先抗体以外的其它动物血清（非免疫的）。有明显溶血的血清不能用，以免产生非特异性染色。免疫荧光染色时，可用0.01%伊文氏兰(PBS溶液)稀释荧光抗体,对消除背景的非特异性荧光染色有很好的效果。当然使用特异性高、效价高的首先抗体是较好重要的条件。洗涤用的缓冲液中加入0.85%~1%NaCl成为高盐溶液,充分洗涤切片,能有效的减少非特异性结合而减少背景染色。融享生物专注于病理实验 免疫荧光,HE染色服务实验如果你有需要可以找融享生物。安徽病理切片免疫组化检测服务电话
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标本
实验所用主要为组织标本和细胞标本两大类，前者包括石蜡切片（病理切片和组织芯片）和冰冻切片，后者包括组织印片、细胞爬片和细胞涂片。
其中石蜡切片是制作组织标本比较好常用、比较好基本的方法，对于组织形态保存好，且能作连续切片，有利于各种染色对照观察；还能长期存档，供回顾性研究；石蜡切片制作过程对组织内抗原暴露有一定的影响，但可进行抗原修复，是免疫组化中优先的组织标本制作方法。抗体
免疫组化实验中常用的抗体为单克隆抗体和多克隆抗体，单克隆抗体是一个B淋巴细胞克隆分泌的抗体，应用细胞融合杂交瘤技术免疫动物制备。多克隆抗体是将纯化后的抗原直接免疫动物后，从动物血中所获得的免疫血清，是多个B淋巴细胞克隆所产生的抗体混合物。
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