拍照
有条件的话比较好立即拍照,若不能及时拍照,也要封好片和用指甲油封固,保持避光和湿度。使用荧光显微镜注意严格按照荧光显微镜出厂说明书要求进行操作,不要随意改变程序;应在暗室中进行检查;防止紫外线对眼睛的损害,在调整光源时应戴上防护眼镜;检查时间每次以1~2h为宜,超过90min,超高压汞灯发光强度逐渐下降,荧光减弱;标本受紫外线照射3~5min后,荧光也明显减弱或褪色;激发光长时间的照射,会发生荧光的衰减和淬灭现象;所以较多不得超过2~3h;荧光显微镜光源寿命有限,标本应集中检查,以节省时间,保护光源。天热时,应加电扇散热降温,新换灯泡应从开始就记录使用时间。灯熄灭后欲再启用时,须待灯光充分冷却后才能点燃。天中应避免数次点燃光源。关闭汞灯至少在开启15-30分钟后;标本染色后立即观察,因时间久了荧光会逐渐减弱。若将标本放在聚乙烯塑料袋中4℃保存,可延缓荧光减弱时间,防止封裱剂蒸发;使用的玻片等载体,都必须厚度均匀,无明显的自发荧光,如果使用油镜,还必须保证镜油为无荧光镜油;电源比较好装稳压器,否则电压不稳不只会降低汞灯的寿命,也会影响镜检的效果。
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色反应的控制 免疫酶染色应注意控制:①成色质浓度和温育时间可调节 ,增加成色质的量和/或增加底物温育时间,可增加反应产物强度。着色太深可减少温育反应时间。②过氧化物酶显色时,H2O2较大浓度将使显色反应过快而致背景加深;过量H2O2可能88酶的活性。
4.复染 根据所用的染色方法和呈显颜色等,可选用适当的复染方法。如阳性结果呈红或棕色,则用苏木素将细胞核染成兰色,以便定位检测。也可用1%~2%甲基绿复染。
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意义编辑
近年来,随着免疫组织化学技术的发展和各种特异性抗体的出现,使许多疑难得到了明确诊断。在常规病理诊断中,5%-10%的病例单靠H.E.染色难以作出明确的形态学诊断。尤其是免疫组化在诊断和鉴别诊断中的实用价值受到了普遍的认可,其在低分化或未分化的鉴别诊断时,准确率可达50%-75%。免疫组织化学的临床应用主要包括以下几方面:
⑴恶性的诊断与鉴别诊断;
⑵确定转移性恶性的原发部位;
⑶对某类进行进一步的病理分型;
⑷软组织的一般需根据正确的组织学分类,因其种类多、组织形态相像,有时难以区分其组织来源,应用多种标志进行免疫组化研究对软组织的诊断是不可缺少的;
⑸发现微小转移灶,有助于临床方案的确定,包括手术范围的确定。
⑹为临床提供方案的选择。
免疫组化。染色 免疫组化可以辅助病理诊断、指导诊断、评估预后,所以在做免疫组化过程中的质控问题处理尤其重要[1]。随着免疫组化试剂新种类不断出现及方法的改进,特别是即用型试剂盒的出现,使抗体的标记更加简便、快捷,更加规范化。免疫组化标准化染色技术是一项实验性很强的技术,任何一个环节出现......免疫组化可以辅助病理诊断、指导诊断、评估预后,所以在做免疫组化过程中的质控问题处理尤其重要,随着免疫组化试剂新种类不断出现及方法的改进,特别是即用型试剂盒的出现,使抗体的标记更加简便、快捷,更加规范化。免疫组化标准化染色技术是一项实验性很强的技术,任何一个环节出现问题,都可以直接影响免疫组化结果。融享生物免疫组化致力于生物领域的科研服务。
众所周知,冰冻切片较突出的优点就是能够较完好地保存抗原的免疫活性 ,即具有抗原敏感性高的优点 。因此对冰冻切片通常不进行抗原修复 ,而在作免疫组化的研究时往往需要对组织进行固定,固定液(如多聚甲醛、福尔马林)使组织中的许多氨基酸残基在分子内或分子间形成醛键,使得不少抗原决定簇被封闭。同时,由于甲醛的聚合作用,使蛋白分子间相互交联形成大分子网络,也导致了抗原有一定的封闭作用 ,从而降低了抗原敏感性。考虑到以上原因,我们对冰冻切片进行高温高压抗原修复并作对比研究。快速高效的制备NGS测序 转录组测序。河北免疫学免疫组化实验公司
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石蜡切片厚4~6μm,捞片于多聚赖氨酸防脱水剂中,60℃烘烤30min~60min,再脱蜡、脱水。这个处理过程的关键是要保证梯度二甲苯和酒精的浓度,使组织脱蜡、脱水干净彻底,否则,水洗后切片含有“油珠”,呈云雾状,冲洗不干净,致使抗体在组织上分布不均,导致染色效果不佳。我科的方法是:普通常规染色所用的梯度二甲苯和酒精与免疫组织化学染色所用的梯度二甲苯和酒精分开,并且定期更换液体。在二甲苯脱蜡时,二甲苯I和II脱蜡时间不少于半小时,梯度酒精各5min左右。如在室温较低时,应将梯度二甲苯放于恒温箱中提前预热,梯度酒精时间延长,保证组织的充分脱蜡脱水。浙江病理切片免疫组化实验公司