封片
为了长期保存，我们一般用中性树胶等封片，避免产生气泡，方法是直接在载玻片组织上滴一滴封片液，然后一手拿住盖片某一拐角，而另一手拿对面的那个拐角，接近封片液近端的拐角先降低，直至接触到液体时为止；当发现液体接触面在不断弥散时，则可以缓慢降低另一拐角，这样一般不会产生气泡。免疫荧光方法中的重要环节
1）冰冻切片制备
建议用新鲜组织，否则组织细胞内部结构破坏，易使抗原弥散。选用干净锋利的刀片、组织一定要冷冻适度等，防止裂片和脱片严重。
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酶消化法 常用的消化酶有胰蛋白酶、胃蛋白酶，应严格掌握好消化时间、温度和浓度。胰蛋白酶使用浓度为0.05%～0.1%，消化温度为37℃，消化时间为10～40**要用于细胞内抗原的显示:胃蛋白酶使用浓度为0.4%，消化温度为37℃，消化时间为30～180要用于细胞间质抗原的显示，如:Laminin（层粘蛋白），Collagen IV（IV型胶原蛋白）等。热修复法 现常用微波修复、高温高压修复、水浴加热修复法。较常用的修复法是pH6.0枸橼酸缓冲液。修复过程中的注意要点是:（1）达到规定的温度（92℃～95℃以上）;（2）维持一定的时间，微波修复、水浴加热须控制在10～15min，高温高压修复须控制在2min左右;（3）避免切片干涸，如果切片干涸，抗原则可能完全丢失;（4）加热后必须经过室温自然冷却20～30min，使未折叠的蛋白分子链恢复天然构型。江西免疫学免疫组化实验公司免疫组化服务找融享。
织材料的处理
组织材料的处理是获得良好免疫组织化学结果的前提，必需保证要检测的细胞或组织取材新鲜，固定及时，形态保存完好，抗原物质的抗原性不丢失、不扩散和被破坏（下节 详述）。
三、免疫染色
可在细胞涂片或组织切片上进行免疫染色。一般程序是：①标记抗体与标本中抗原反应结合；②用PBS洗去未结合的成分；③直接观察结果（免疫荧光直接法）；或显色后再用显微镜观察（免疫酶直接法）。在此基础上发展出间接法，多层法，双标记法等各种方法，将在本书各有关章 节 内详述。
复染
目的是形成细胞轮廓，从而更好地对目标蛋白进行定位，经常用苏木素复染（胞核染料）。注意苏木素复染时间要看当时的室温、溶液的新旧、目标抗原的定位等情况，一般数秒-数分钟，胞浆蛋白可以适当时间长一点，而胞核算白则要短。不过这个如果染色不理想可以补救的。方法是：染色深则分化时间稍长些即可；染色浅则再置于苏木素中染色即可。盐酸酒精是分化，氨水是返兰。作用不同。片子复染完后流水振洗，然后置于盐酸酒精中数秒（一定动作要快）后拿出流水振洗，在放入氨水中返兰即可。
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分类
1）按标记物质的种类，如荧光染料、放射性同位素、酶（主要有辣根过氧化物酶和碱性磷酸酶）、铁蛋白、胶体金等，可分为免疫荧光法、放射免疫法、免疫酶标法和免疫金银法等。
2）按染色步骤可分为直接法（又称一步法）和间接法（二步、三步或多步法）。与直接法相比，间接法的灵敏度提高了许多。
3）按结合方式可分为抗原-抗体结合，如过氧化物酶-抗过氧化物酶（***）法；亲和连接，如卵白素-生物素-过氧化物酶复合物（ABC）法、链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结（SP）法等，其中SP法是比较常用的方法；聚合物链接，如即用型二步法，此方法尤其适合于内源性生物素含量高的组织抗原检测。
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免疫组化。染色 免疫组化可以辅助病理诊断、指导诊断、评估预后，所以在做免疫组化过程中的质控问题处理尤其重要［1］。随着免疫组化试剂新种类不断出现及方法的改进，特别是即用型试剂盒的出现，使抗体的标记更加简便、快捷，更加规范化。免疫组化标准化染色技术是一项实验性很强的技术，任何一个环节出现......免疫组化可以辅助病理诊断、指导诊断、评估预后，所以在做免疫组化过程中的质控问题处理尤其重要，随着免疫组化试剂新种类不断出现及方法的改进，特别是即用型试剂盒的出现，使抗体的标记更加简便、快捷，更加规范化。免疫组化标准化染色技术是一项实验性很强的技术，任何一个环节出现问题，都可以直接影响免疫组化结果。山东免疫学免疫组化哪家好
