经验总结编辑
做过病理实验的人都知道，实验看似容易，但真想把它做好，还是需要花上很长一段时间去积累和摸索经验。我从事病理实验已有6年多了，在这段时间里，我做过许许多多病理相关实验，刚开始啥也不懂，一味按照网上操作流程来做，但做的结果往往并不是十分理想，较好终结果未能达到预期的效果。经过一段时间的浏览和学习，从一些在论坛内学习、请教，并结合实践操作，我经历了初级——查找资料和摸索方法；中级——问题求助和不断总结；高级——难题解答和经验分享这三个阶段，也学到了不少知识，积累了很多宝贵经验，与大家一起分享下。
关于掉片
HE、Masson、番红O、Nissl、Mallory等染色方法很少有掉片现象；免疫组化和细胞凋亡检测我们采用专门购买的防脱片，由于整个实验流程比较长，在实验过程中产生掉片是很正常的现象。对于容易掉片的组织，如：骨组织、脑组织、皮肤组织等掉片有时候是不可避免的。
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减少或消除非特异性染色的方法 组织中非抗原抗体反应出现的阳性染色称为非特异性背景染色，较好常见的原因是蛋白吸附于高电荷的胶元和结缔组织成分上。有效方法是在用首先抗体前加制备第二抗体动物之非免疫血清（1：5-1：20）封闭组织上带电荷基团而除去与首先抗体非特异性结合。必要时可加入2%-5%牛血清白蛋白，可进一步减少非特异性染色。作用时间为10-20min。也可用除制备首先抗体以外的其它动物血清（非免疫的）。有明显溶血的血清不能用，以免产生非特异性染色。免疫荧光染色时，可用0.01%伊文氏兰(PBS溶液)稀释荧光抗体,对消除背景的非特异性荧光染色有很好的效果。当然使用特异性高、效价高的首先抗体是较好重要的条件。洗涤用的缓冲液中加入0.85%~1%NaCl成为高盐溶液,充分洗涤切片,能有效的减少非特异性结合而减少背景染色。黑龙江IHC免疫组化机构哪里有专业从事免疫实验的整体方案。
（1）ABC复合物的制备：（2）ABC法反应原理6．SP或SAP法（过氧化物酶标记的链霉卵白素或过氧化物酶标记的碱性磷酸酶染色）Streptavidin/peroxidaseorstrepta-vidin/alkalinephosphatase）※该法是ABC法基础上的进一步改良，使卵白素与链霉（而非生物素）结合，而后再结合PO。它有4个亚基可与生物素结合，灵敏特异，背景低，成本低。现在还有plus盒。优点是：更简便，放大倍数↑，等电点中性更适合组织。分子量小，穿透力↑。7．蛋白A—金法（Protein—Agoldmethod）~多用于电镜8．双重组化染色法应用双重免疫组织化学可在同一张切片，同一细胞或亚细胞结构内同时显示两种不同的抗原。9．免疫金—银染色法（Immunogold—silverstainingIGSS）固定——见前述注意事项：1．固定剂的选择：因组织而不同，注意质量和性能。2．固定方式的选择：①浸渍固定（参考文献）②灌注固定（+后固定）③蒸汽固定免疫组化染色步骤（以ABC法为例）1．切片脱蜡入水，入PBS洗三次/15分钟。2．封闭内源性过氧化物酶。用新配置的（在PAS或—HCL缓冲液）室温，30分钟。3．水洗，入PBS，洗三次，每次5分钟。4．减少非特异性着色用稀释20倍的正常血清（产生二次抗体动物血清！），室温，30分钟。
石蜡切片由于在制作过程中使用大量有机溶剂（酒精、二甲苯）和（或）包埋过程中加热处理使抗原活性丧失，所以通常采用抗原修复方法来提高石蜡切片免疫组化反应的敏感性。而对于冰冻切片的制作由于不经过上述过程，在以往的研究中通常不再经过抗原修复而直接做免疫组化。但用冰冻切片做免疫组化研究时通常采用多聚甲醛固定，众所周知多聚甲醛对抗原有封闭作用，并且在神经系统中由于抗原表达量较微量，造成免疫组化染色中需要配制较高浓度的抗体工作液，造成抗体消耗较大，染色效果不佳。因此本文采用抗原修复和不修复两组切片进行免疫组化染色，比较免疫反应敏感程度，以期进一步提高免疫组化反应的敏感性。免疫组化服务找融享。
物质所具有的抗原性主要由分布在抗原表面的抗原决定簇决定。固定液的固定对免疫组化的正确结果极其重要，此液能使抗原保存良好。抗原修复的好坏直接影响着免疫组化检测结果的可靠性。在进行免疫组化时并非所有的抗原都要进行抗原修复，抗原性保存良好或基本保存者不需要修复。目前抗原修复的方法主要有蛋白酶消化法、硼氢化钠（NaBH4）修复法和热修复法。较常用的是热修复法，尤其是细胞核抗原经热修复后，其染色效果特别好。所以我们必须清楚影响抗原性的因素及各种抗原修复的方法，严格按照抗体说明书进行抗原修复。鉴于抗原修复时间的方法较多，在实际工作中，究竟选用何种抗原修复法，应根据抗原抗体种类予以选择，必要时可以多种方法同时使用，这样使其更具有针对性，标记结果更理想。免疫组化哪里好就找融享生物。浙江免疫组化公司哪家好
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如肽类、神经递质、细胞因子、受体、表面抗原等等均可用免疫组织化学方法显示，因而目前在基础与临床科研中被广泛应用。较近几年，分子生物学研究异常活跃，但较终还要归到形态上来。用免疫组织化学方法对所研究的大分子分子进行定位，进而深入研究其功能。免疫组化技术免疫组织化学编辑染色方法1．直接法荧光素直接标记特异性抗体（—抗）上，标记抗体与抗原结合（在切片上）荧光显微镜下观察→检测抗原。△酶标抗体要显示后镜检。直接法优点：简单，时间短，特异性强。缺点：灵敏度低，所需抗体量大（不经济）。应用：基本不用！2．间接法荧光素标记在二抗上（二抗：抗产生一抗动物的IgG抗体）。※显色后镜检特点：较直接法灵敏，可标记一种抗体→鉴定多种抗原。3．非标记Ab桥法：“桥法”是酶标记抗体的改进，经过三次抗体，其二抗为未标记桥抗体。（1）单桥法(2)双桥法在三抗之后，将二抗和三抗再重复一次，可增大染色强度。★特别提示：注意动物种属关系4．***法（过氧化物酶—抗过氧化物酶法Peroxidaseanti—peroxidasemethod，***法）~是桥法的改良，既先形成***复合物→抗原—抗体—抗IgG抗体—***复合物。该法简化了操作步骤，提高了灵敏度。福建荧光免疫组化机构哪家好
