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免疫组化基本参数
  • 品牌
  • 融享
  • 公司名称
  • 上海融享生物科技有限公司
  • 行业类型
  • 生物行业
  • 安全质量检测类型
  • 可靠性检测
  • 服务内容
  • 免疫组化
  • 所在地
  • 上海
  • 检测类型
  • 行业检测
  • 服务分类
  • HE染色
免疫组化企业商机

意义编辑

近年来,随着免疫组织化学技术的发展和各种特异性抗体的出现,使许多疑难得到了明确诊断。在常规病理诊断中,5%-10%的病例单靠H.E.染色难以作出明确的形态学诊断。尤其是免疫组化在诊断和鉴别诊断中的实用价值受到了普遍的认可,其在低分化或未分化的鉴别诊断时,准确率可达50%-75%。免疫组织化学的临床应用主要包括以下几方面:

⑴恶性的诊断与鉴别诊断;

⑵确定转移性恶性的原发部位;

⑶对某类进行进一步的病理分型;

⑷软组织的一般需根据正确的组织学分类,因其种类多、组织形态相像,有时难以区分其组织来源,应用多种标志进行免疫组化研究对软组织的诊断是不可缺少的;

⑸发现微小转移灶,有助于临床方案的确定,包括手术范围的确定。

⑹为临床提供方案的选择。


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实验所用主要为组织标本和细胞标本两大类,前者包括石蜡切片(病理大片和组织芯片)和冰冻切片,后者包括组织印片、细胞爬片和细胞涂片。


其中石蜡切片是制作组织标本较好常用、较好基本的方法,对于组织形态保存好,且能作连续切片,有利于各种染色对照观察;还能长期存档,供回顾性研究;石蜡切片制作过程对组织内抗原暴露有一定的影响,但可进行抗原修复,是免疫组化中推荐的组织标本制作方法。免疫组化实验中常用的抗体为单克隆抗体和多克隆抗体。单克隆抗体是一个B淋巴细胞克隆分泌的抗体,应用细胞融合杂交瘤技术免疫动物制备。多克隆抗体是将纯化后的抗原直接免疫动物后,从动物血中所获得的免疫血清,是多个B淋巴细胞克隆所产生的抗体混合物。


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定位准确、形态与功能相结合

该技术通过抗原抗体反应及呈色反应,可在组织和细胞中进行抗原的准确定位,因而可同时对不同抗原在同一组织或细胞中进行定位观察,这样就可以进行形态与功能相结合的研究,对病理学领域开展深入研究是十分有意义的。

7、从蛋白水平检测角度,免疫组化技术与Western blotting、ELISA的异同

1)Western blotting

蛋白质免疫印迹,也是利用抗体抗原反应原理,结合化学发光等技术来检查组织或细胞样品内蛋白含量的检测方法。与免疫组化技术相比,定量可能更加准确;当然Western blotting也可定性和定位(通过提取膜蛋白或核酸白、胞浆蛋白分别检测其中抗原含量,进而间接反映它们的定位),但敏感性远远低于免疫组化技术。


    如肽类、神经递质、细胞因子、受体、表面抗原等等均可用免疫组织化学方法显示,因而目前在基础与临床科研中被广泛应用。较近几年,分子生物学研究异常活跃,但较终还要归到形态上来。用免疫组织化学方法对所研究的大分子分子进行定位,进而深入研究其功能。免疫组化技术免疫组织化学编辑染色方法1.直接法荧光素直接标记特异性抗体(—抗)上,标记抗体与抗原结合(在切片上)荧光显微镜下观察→检测抗原。△酶标抗体要显示后镜检。直接法优点:简单,时间短,特异性强。缺点:灵敏度低,所需抗体量大(不经济)。应用:基本不用!2.间接法荧光素标记在二抗上(二抗:抗产生一抗动物的IgG抗体)。※显色后镜检特点:较直接法灵敏,可标记一种抗体→鉴定多种抗原。3.非标记Ab桥法:“桥法”是酶标记抗体的改进,经过三次抗体,其二抗为未标记桥抗体。(1)单桥法(2)双桥法在三抗之后,将二抗和三抗再重复一次,可增大染色强度。★特别提示:注意动物种属关系4.PAP法(过氧化物酶—抗过氧化物酶法Peroxidaseanti—peroxidasemethod,PAP法)~是桥法的改良,既先形成PAP复合物→抗原—抗体—抗IgG抗体—PAP复合物。该法简化了操作步骤,提高了灵敏度。转录组测序价格那家好找融享生物。

物质所具有的抗原性主要由分布在抗原表面的抗原决定簇决定。固定液的固定对免疫组化的正确结果极其重要,此液能使抗原保存良好。抗原修复的好坏直接影响着免疫组化检测结果的可靠性。在进行免疫组化时并非所有的抗原都要进行抗原修复,抗原性保存良好或基本保存者不需要修复。目前抗原修复的方法主要有蛋白酶消化法、硼氢化钠(NaBH4)修复法和热修复法。较常用的是热修复法,尤其是细胞核抗原经热修复后,其染色效果特别好。热修复包括单纯加热、高压加热和微波加热3种,其原理是以热效应来引导抗原决定基重新暴露。热修复法影响抗原修复的关键因素有两个:一是温度,至少要达到100 ℃,时间3~15 min;二是修复液的pH值为7.5~8.5。所以我们必须清楚影响抗原的因素及各种抗原修复的方法,严格按照抗体说明书进行抗原修复。鉴于抗原修复的方法较多,在实际工作中,究竟选用何种抗原修复,应根据抗体种类予以选择,必要时可以多种方法同时使用,这样使其更具有针对性,标记结果更理想。组化染色结果有很大影响。转录组找上海融享生物而科技有限公司。北京动物实验免疫组化公司哪里有

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石蜡切片由于在制作过程中使用大量有机溶剂(酒精、二甲苯)和(或)包埋过程中加热处理使抗原活性丧失,所以通常采用抗原修复方法来提高石蜡切片免疫组化反应的敏感性。而对于冰冻切片的制作由于不经过上述过程,在以往的研究中通常不再经过抗原修复而直接做免疫组化。但用冰冻切片做免疫组化研究时通常采用多聚甲醛固定,众所周知多聚甲醛对抗原有封闭作用,并且在神经系统中由于抗原表达量较微量,造成免疫组化染色中需要配制较高浓度的抗体工作液,造成抗体消耗较大,染色效果不佳。因此本文采用抗原修复和不修复两组切片进行免疫组化染色,比较免疫反应敏感程度,以期进一步提高免疫组化反应的敏感性。山西组织免疫组化哪里有

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