上海翼和生物通过亚硫酸氢盐（bisulfite）处理，用多重PCR扩增目的片段，添加barcode和测序通用接头，在Illumina X10二代测序平台对PCR产物进行高通量测序，利用生物信息学方法，精确定量计算目标区间内的甲基化位点的甲基化状态，在完成目标区域检测的同时大幅降低研究费用。Hi-MethylSeq结合了亚硫酸盐转换、靶向扩增子高通量测序技术，可实现多区段、多位点的甲基化精确定量分析。本方法适用于感兴趣的目的片段的甲基化研究，在大样本中进一步确认全基因组甲基化研究挑选的阳性位点。重亚硫酸盐处理是甲基化分析中基因组DNA处理的金标准，是一个化学过程，可造成DNA的损伤，很难同时实现100%的转换效率和保持DNA的完整性，二者需要做出一定的平衡。Hi-MethylSeq在CpG岛之外选取3段内参序列中的C作为内对照，准确评估样本的转化率。DNA甲基化的位置主要集中在基因5′端的非编码区，DNA高度甲基化首先会影响DNA结构,引起基因沉默。天津目标区段甲基化重测序公司
DNA甲基化是表观遗传调控的常见机制。启动子区域的高度甲基化可导致基因表达改变。甲基化多发生于胞嘧啶（cytosine, C）位置。在细胞和组织分化、疾病发生以及适应环境等过程中，甲基化状态可发生改变。高精确度全基因组甲基化修饰状态的分析，将为发育、育种、tumour标志物鉴定或药物靶标寻找等研究奠定基础。全基因组甲基化测序结合了亚硫酸氢盐转化（bisulfite conversion）方法与新一代高通量测序技术，可在单碱基分辨率水平上高效地检测全基因组DNA甲基化状态。亚硫酸氢盐处理可以使DNA中未发生甲基化的胞嘧啶脱氨基转变成尿嘧啶，而甲基化的胞嘧啶保持不变，PCR扩增所需片段，则尿嘧啶全部转化成胸腺嘧啶。对PCR产物进行高通量测序，与参考序列比对，即可判断CpG/CHG/CHH位点是否发生甲基化。目标区段甲基化重测序分析亚硫酸氢盐处理可以使DNA中未发生甲基化的胞嘧啶脱氨基转变成尿嘧啶，而甲基化的胞嘧啶保持不变。
DNA甲基化一直以来都是表观遗传学领域研究的重点之一。DNA甲基化（Methylation）是指在DNA甲基转移酶（DNA methyltransferase, 缩写DNMT）的作用下，基因组DNA序列上CpG岛的二核苷酸5′端胞嘧啶转变为5′甲基胞嘧啶（5′ methylcytosine, 缩写5mC）。这种DNA修饰的方式并未改变基因的序列, 但能抑制某些基因的表达。在哺乳动物中，基因组DNA的甲基化可分为两种类型：维持甲基化（maintenance DNA methylation）和重新甲基化（de novo methylation）。维持甲基化是指在甲基转移酶的作用下，DNA的半保留复制过程中，会在子链的相应的位置进行甲基化修饰的过程。重新甲基化是指在甲基转移酶的作用下，原来没有甲基化的DNA双链上，进行甲基化的过程，之后由维持甲基化酶来维持稳定的DNA甲基化状态。对于这两种甲基化机制来说，有两种对应类型的甲基化酶：维持甲基转移酶和重新甲基转移酶。
DNA甲基化是指生物体在DNA甲基转移酶(DNA methyltransferase，DMT) 的催化下，以s-腺苷甲硫氨酸(SAM)为甲基供体，将甲基转移到特定的碱基上的过程。DNA甲基化能降低某些基因的表达活性，去甲基化则能引起基因的重新活化和表达。DNA甲基化能引起染色质的结构、DNA构象、DNA稳定性及DNA与蛋白质之间的相互作用方式的改变，从而影响基因表达。研究证实，CpG二核苷酸中胞嘧啶的甲基化导致了人体1/3以上由于碱基变异而引起的遗传性疾病。由于DNA甲基化与人体发育和tumour疾病的密切关系，特别是CpG岛甲基化引起的抑cancer基因的转录失活，使得DNA甲基化成为表观遗传学和表观基因组学的重要研究内容。重亚硫酸盐测序本质上就是重亚硫酸盐转化与二代测序（NGS）的结合。
DNA甲基化是研究 为普遍的表观遗传修饰，它被认为在许多生物学过程和疾病中有着重要的作用。随着测序技术的快速发展，二代测序与重亚硫酸盐处理基因组DNA相结合产生了可以在全基因组单碱基水平上测量DNA甲基化水平的全基因组重亚硫酸盐测序（whole-genome bisulfite sequencing，WGBS）技术。WGBS的流程与全基因组DNA测序主要区别于DNA文库的构建。以MethlyC-seq为例，将DNA 段化后收集特定长度的片段并修复DNA末端，再将双端加上3′-dAMP然后连接上甲基化的接头，接着用重亚硫酸盐处理DNA使未甲基化的胞嘧啶（C）转化为尿嘧啶（U）， 终进行低循环数的PCR扩增后完成建库，建库完后上机测序，得到原始数据（fastq文件）后，完成一定的质量控制后就可以进行mapping分析。DNA甲基化属于表观遗传的范畴。天津目标区段甲基化重测序公司
重亚硫酸盐扩增子测序法基于非甲基化胞嘧啶（C）向尿嘧啶（U）的化学转化，即用重亚硫酸盐处理基因组DNA。天津目标区段甲基化重测序公司
全基因组重亚硫酸盐甲基化测序（WGBS）可以在全基因组范围内精确的检测所有单个胞嘧啶碱基（C碱基）的甲基化水平，是DNA甲基化研究的金标准。WGBS能为基因组DNA甲基化修饰的研究提供重要技术支持，能广泛应用在个体发育、衰老和cancer发生等生命过程的机制研究中。其原理是用 Bisulfite 处理DNA序列，首先将基因组中未发生甲基化的 C 碱基转换成U（T），从而与原本具有甲基化修饰的碱基C区分开来，然后进行PCR扩增，结合高通量测序技术，适用于全基因组范围内绘制单碱基分辨率的DNA 甲基化图谱。天津目标区段甲基化重测序公司
上海翼和应用生物技术有限公司专注技术创新和产品研发，发展规模团队不断壮大。公司目前拥有专业的技术员工，为员工提供广阔的发展平台与成长空间，为客户提供高质的产品服务，深受员工与客户好评。上海翼和应用生物技术有限公司主营业务涵盖细胞组织小鼠质控，大健康检测，生物技术服务，坚持“质量保证、良好服务、顾客满意”的质量方针，赢得广大客户的支持和信赖。公司力求给客户提供全数良好服务，我们相信诚实正直、开拓进取地为公司发展做正确的事情，将为公司和个人带来共同的利益和进步。经过几年的发展，已成为细胞组织小鼠质控，大健康检测，生物技术服务行业出名企业。
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