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甲基化重测序基本参数
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甲基化重测序企业商机

亚硫酸氢盐测序法用亚硫酸氢钠对 DNA 进行化学处理会使甲基化特异性序列变异,从而可以通过NGS进行定位和量化,主要的DNA甲基化数据分析流程:获得DNA甲基化数据之后,首先,需要对数据进行处理和质量的基本控制,包括原始测序和芯片数据的读取、转换到产生准确的DNA甲基化图谱;其次,需要对DNA甲基化位点的结果进行可视化,并且利用统计学方法鉴定样本特异性差异的DNA甲基化位点;第三,验证 DNA 甲基化差异位点,并且对其进行生物学解释。全基因组DNA甲基化测序是用 Bisulfite 处理DNA序列。杭州多重PCR技术甲基化重测序送样要求

在表观遗传中,DNA甲基化修饰具有非常重要的地位。其中胞嘧啶杂环5号位的甲基化修饰,又称作5-甲基胞嘧啶(5mC),是**常见的甲基化修饰方式,也是迄今为止研究**为普遍的DNA甲基化修饰方式。一般认为当DNA甲基化出现在基因启动子区,就会抑制基因转录,从而起到负调控的作用。DNA甲基化的形成机制,包括从头合成(de novo),甲基化的维持(Maintenance)和去甲基化(Demethylation),这些过程分别由不同的基因和通路调控。这些基因和通路在动植物中即保守,又有所区别。目标位点甲基化重测序报告在基因组的某些区域中,通常位于基因的启动子区,CpG 序列密度很高,可以达均值的5 倍以上。

DNA甲基化是表观遗传调控的常见机制。启动子区域的高度甲基化可导致基因表达改变。甲基化多发生于胞嘧啶(cytosine, C)位置。在细胞和组织分化、疾病发生以及适应环境等过程中,甲基化状态可发生改变。高精确度全基因组甲基化修饰状态的分析,将为发育、育种、tumour标志物鉴定或药物靶标寻找等研究奠定基础。全基因组甲基化测序结合了亚硫酸氢盐转化(bisulfite conversion)方法与新一代高通量测序技术,可在单碱基分辨率水平上高效地检测全基因组DNA甲基化状态。亚硫酸氢盐处理可以使DNA中未发生甲基化的胞嘧啶脱氨基转变成尿嘧啶,而甲基化的胞嘧啶保持不变,PCR扩增所需片段,则尿嘧啶全部转化成胸腺嘧啶。对PCR产物进行高通量测序,与参考序列比对,即可判断CpG/CHG/CHH位点是否发生甲基化。

上海翼和生物甲基化测序采用的是重亚硫酸盐扩增子测序法(Bisulfite Amplicon Sequencing, BSAS),重亚硫酸盐转化是研究DNA甲基化的金标方法,该技术基于非甲基化胞嘧啶(C)向尿嘧啶(U)的化学转化,即用重亚硫酸盐处理基因组DNA,非甲基化胞嘧啶被转化为尿嘧啶,而甲基化胞嘧啶不发生这种转化,从而能够在单核苷酸水平上确定DNA甲基化(图1)。转化后的序列可以进行多种分析,包括重亚硫酸盐测序、焦磷酸测序、甲基化特异性PCR、高分辨率熔解曲线分析、基于微阵列的方法和下一代测序。如果在细胞分裂过程中不被纠正,就会诱发遗传病或tumour,而且,生物体甲基化的方式是稳定的, 可遗传的。

表观遗传学研究已经证实了特定基因区域的DNA甲基化修饰对于染色体构象、基因表达调控机制有着重要影响,而全基因组DNA甲基化研究将是表观基因组学为关注的内容之一。Bisulfite处理能够将基因组中未发生甲基化的C碱基转换成U,进行PCR扩增后变成T,与原本具有甲基化修饰的C碱基区分开来,再结合高通量测序技术,可绘制单碱基分辨率的全基因组DNA甲基化图谱。特定物种的高精确度甲基化修饰模式的分析,必将在表观基因组学研究中具有里程碑式的意义,并且为细胞分化、组织发育等基础机制研究,以及动植物育种、人类健康与疾病研究奠定基础。DNA甲基化是研究**为普遍的表观遗传修饰,它被认为在许多生物学过程和疾病中有着重要的作用。成都bisulfite甲基化重测序分析

甲基化的金标准是亚硫酸氢盐测序法.杭州多重PCR技术甲基化重测序送样要求

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