亚硫酸氢钠修饰后测序法是一种对DNA进行亚硫酸氢钠处理、聚合酶链反应扩增与DNA测序相结合的方法，能够提供测定区域的序列信息，准确定位甲基化胞嘧啶位点；重亚硫酸盐修饰后，甲基化胞嘧啶保持不变，但非甲基化胞嘧啶转变为尿嘧啶，PCR扩增后为胸腺嘧啶，其将甲基化状态的差异转化成碱基的差异，从而对胞嘧啶的甲基化状态进行分析；但在亚硫酸钠处理的酸性环境下，单链特异性PCR模板稳定性下降，容易降解；并且模板链CG二核苷酸水平高易形成复杂的二级结构，常出现非特异性条带，结合“巢式PCR法”能明显提高扩增的特异度。重亚硫酸盐测序本质上就是重亚硫酸盐转化与二代测序（NGS）的结合。北京亚硫酸盐甲基化重测序送样要求
DNA甲基化（DNA methylation）为DNA化学修饰的一种形式，能在不改变DNA序列的前提下，改变遗传表观。 DNA甲基化在维持细胞正常功能、传递基因组印记，胚胎发育、tumour发生等方面发挥重要作用，目前已经成为表观遗传学和表观基因组学的研究热点。DNA甲基化测序可在全基因组水平上比较大限度的、完整的获取甲基化状态信息和与基因表达调控的多重关系，可高效精确完成全基因组甲基化测序及*分辨DNA甲基化谱式绘制，并可对发现的靶点区进行甲基化特异性PCR验证。北京目标区间甲基化重测序送样要求DNA甲基化在DNA复制起始、错配修复以及转座子的失活等过程中对维持遗传信息的稳定性发挥着重要的作用。
DNA甲基化是一种重要的表观遗传学标记，在调控基因表达、细胞的分化与发育等过程中发挥着关键作用。使用基于重亚硫酸氢盐测序的方法进行DNA甲基化评估：首先用亚硫酸氢盐处理基因组DNA可将未甲基化胞嘧啶转化为尿嘧啶（黄色字母），而甲基化胞嘧啶保留为胞嘧啶（白色字母）；然后进行两轮PCR：first轮PCR分别放大每个样本的每个区域，并添加8个随机核苷酸（N8）用于重复数据消除和适配体序列；在汇集每个生物样本的扩增子后，第二轮PCR完成带有样本barcode的序列库，用于多样本NGS测序。
DNA甲基化即在DNA上增加甲基基团，是使基因的转录抑制或沉默的主要方式。该修饰特异性地发生在CpG位点，胞嘧啶通过磷酸盐与鸟苷酸连接(图1)。甲基基团的插入改变了DNA的表观和结构，可能会直接阻碍DNA的识别及与转录因子的结合，或者吸引其他因子优先与DNA结合，干扰转录因子的结合。目前已鉴定了三个与甲基化DNA结合的蛋白家族，包括MBD蛋白、Kaiso和Kaiso样蛋白、以及SRA蛋白。通过招募这些蛋白，DNA甲基化可促进某些组蛋白状态的维持，如去乙酰作用，从而保持转录后的组蛋白修饰。例如，MBD家族的甲基CpG结合蛋白2(MeCP2)与甲基CpG结合，招募HDACs，可促使染色体浓缩和转录抑制。5 位C 甲基化的胞嘧啶脱氨基生成胸腺嘧啶, 由此可能导致基因置换突变, 发生碱基错配: T2G。
DNA去甲基化分为两类：主动去甲基化（Active DNA Demethylation）和被动去甲基化（Passive DNA Demethylation）。基因组甲基化模式的形成主要依赖于主动去甲基化，主要涉及一类具有DNA去甲基化功能的蛋白，可能存在的五种机制a. DNA转葡糖基酶参与的碱基切除修复（base excision repair；BER）：5-mC 由DNA 转葡糖基酶直接去除。此途径主要存在于植物体内，动物体内也可能存在。b.脱氨酶参与的碱基切除修复：5-mC 脱氨变成胸腺嘧啶T，形成G/T 错配，进入BER 途径。这一途径主要存在于动物体中，植物体中也可能存在。c.核苷酸外切修复机制（nucleotide excision repair；NER）：直接移除甲基化的CpG 二核苷酸。d.氧化去甲基化：发生氧化反应打开碳-碳键，直接去除甲基基团。e.水解去甲基化：水解胞嘧啶的甲基基团，使其以甲醇的形式被释放。DNA被动去甲基化是指当DNMTs活性被抑制或浓度过低时，无法维持原有的甲基化状态，使DNA甲基化程度降低的过程，这类去甲基化通常发生在细胞复制的两个周期之间，涉及到某些可与DNMTs结合的因子，其结合后形成的复合物可以阻止DNMTs与DNA的结合。DNA甲基化是一种表观遗传修饰，是由DNA甲基转移酶催化S-腺苷甲硫氨酸(S-adenosylmethionine)作为甲基供体.广州目标甲基化重测序哪里做
WGBS（Whole Genome Bisulfite Sequence）全基因组甲基化测序.北京亚硫酸盐甲基化重测序送样要求
DNA甲基化过程在一些生物学现象中起重要作用。例如，在原核生物中，它参与毒力、细胞周期调控、基因表达和对外源 DNA 导入的保护（DNA-宿主特异性）等过程。在高等真核生物中，DNA 甲基化参与调控染色体稳定性、印记、X 染色体失活和cancer 变等多个细胞过程。在哺乳动物中，DNA 甲基化主要发生在胞嘧啶碱基的第五个碳原子上，形成 5-甲基胞嘧啶或 5-甲基胞嘧啶核苷 (5-mC)。DNA甲基化几乎只存在于CpG二核苷酸上，是一个关键的表观遗传标记和基因表达调控因子。基因启动子或 CpG 岛处的甲基化 CpG 簇与基因失活有关。DNA 甲基化由一个被称为 DNA 甲基转移酶并包括 DNMT1、DNMT3a 和 DNMT3b 的酶家族催化。DNMT3a 和 DNMT3b是从头合成的甲基转移酶，能够甲基化之前未甲基化的 CpG二核苷酸。相反，DNMT1是一种维持性甲基转移酶，在复制过程中修饰半甲基化的 DNA。北京亚硫酸盐甲基化重测序送样要求
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