大肠埃希氏菌(Escherichiacoli)通常称为大肠杆菌,约占肠道菌中的1%。是一种两端钝圆、能运动、无芽孢的革兰氏阴性短杆菌。大肠杆菌在1885年由Escherich发现,它分布在自然界,大多数不致病,主要附生在人或动物的肠道里,为正常菌群。少数大肠杆菌具有毒性,可引起疾病。婴儿出生后大肠杆菌即随哺乳进入肠道,其代谢活动能抑制肠道内分解蛋白质的微生物生长,减少蛋白质分解产物对人体的危害,还能合成维生素B和K,正常栖居条件下不致病,若进入胆囊、膀胱等处可引起炎症。若在水和食品中检出大肠杆菌,可认为是被粪便污染的指标。因此大肠菌群数(或大肠菌值)常作为饮水、食物或药物的卫生学标准。枯草芽孢杆菌具有更强的营养物质竞争能力以及氧气竞争优势。椒霜疫霉菌株
动物的大肠杆菌病可以发生在多种家畜、家禽、养殖经济动物以及其他陆生动物和某些水产动物,其中猪和鸡是至为易感的,而且危害十分严重。通常大肠杆菌的染上均是以幼龄动物的发病率和死亡率高。发病季节大肠杆菌在动物群体间的染上的季节发病特征不是非常明显。在一年四季猪均可发生,但只要是发生在猪的产仔期至断乳期,这与猪的易感日龄相关联。犊牛和羔羊多发生于冬季和春季的舍饲时期。其他动物的大肠杆菌染上在常年均有发生,季节性不明显。椒霜疫霉菌株购买大肠杆菌时要注意价格是否合理,避免被坑。
冻存铜绿假单胞杆菌时,要先消化细胞,将细胞悬液收集至离心管中。1000rpm离心10分钟,弃上清液。沉淀加含保护液的培养,计数,调整至5×106/毫升左右。将悬液分至冻存管中,每管1毫升。将冻存管口封严。如用安瓿瓶则火焰封口,封口一定要严,否则复苏时易出现爆裂。贴上标签,写明细胞种类,冻存日期。冻存管外拴一金属重物和一细绳。按顺序降温,室温→4摄氏度(20分钟〕→冰箱冷冻室(30分钟)→低温冰箱(-30摄氏度1小时)→气态氮(30分钟)→液氮。注意操作时应小心,以免液氮冻坏。液氮定期检查,随时补充,不能挥发干净,一般30立升的液氮能用1~1.5月。
枯草芽孢杆菌菌体自身合成α-淀粉酶、蛋白酶、脂肪酶、纤维素酶等酶类,在消化道中与动物体(人体)内的消化酶类一同发挥作用。能合成维生素B1、B2、B6、烟酸等多种B族维生素,提高动物体(人体)内干扰素和巨噬细胞的活性。枯草芽孢杆菌对特殊菌体进行促芽孢和微胶囊包被处理,在芽孢状态下稳定性好,能耐氧化;耐挤压;耐高温,能长期耐60摄氏度高温,在120摄氏度温度下能存活20分钟;耐酸碱,在酸性胃环境中能保持活性,可以耐唾液和胆汁的攻击,是微生物中可100%直达大小肠的活菌。金黄色葡萄球37℃为适生长温度,能在各种恶劣环境中存活下来。
肠毒大肠杆菌是大多数疫苗开发工作所关注的大肠杆菌类型。针对肠毒大肠杆菌的不耐热肠毒和主要定居因子的抗体提供了对产生不耐热肠毒、表达同源定居因子的肠毒大肠杆菌的保护。已经开发了由毒抗原和全细胞组成的口服灭活疫苗,即许可的重组霍乱B亚单位(rCTB)-WC霍乱疫苗Dukoral。肠毒大肠杆菌目前没有获得许可的疫苗,尽管有几种疫苗处于不同的开发阶段。在不同的试验中,rCTB-WC霍乱疫苗提供了很高(85–100%)的短期保护。一种口服肠毒大肠杆菌候选疫苗由rCTB和表达主要定居因子的福尔马林灭活大肠杆菌组成,临床试验表明该疫苗对美国旅行者的严重腹泻是安全的、免疫原性的和有效的,但对埃及儿童的肠毒大肠杆菌腹泻无效。一种由过表达定居因子的重组大肠杆菌株和一种更类似不耐热肠毒的混合类毒LCTBA组成的改良肠毒大肠杆菌疫苗正在进行临床试验。枯草芽孢杆菌有着很好的促生作用。产吲哚金黄杆菌菌株
目前国际公认的分类,主要有六个种类的大肠杆菌。椒霜疫霉菌株
大肠杆菌表达系统的组成:(一)表达载体:一个完整的质粒载体需要有:复制起点、启动子、插入的目的基因、筛选标记以及终止子。(二)外源基因:在大肠杆菌表达体系中要表达的基因即外源基因,包括原核基因和真核基因。原核基因可以在大肠杆菌中直接表达,但是真核基因含有内含子,大肠杆菌不能对mRNA进行剪切,从而真核基因一般以cDNA的形式在大肠杆菌表达系统中表达。目的蛋白在大肠杆菌系统表达中的形式有二种。一种是在细胞内表现为不溶性的包涵体颗粒。另一种是在细胞内表现为可溶性的蛋白质。可溶性的目标蛋白质除可存在于细胞质中外,还可借助于本身的功能序列和大肠杆菌蛋白质加工、运输体系,至终分泌到周质空间,或外泌到培养液中。(三)宿主细胞:大肠杆菌蛋白表达过程中很重要的因素就是宿主细胞的选择。对于宿主细胞的选择主要根据宿主细胞各自的特征及目的蛋白的特性。对于是适合目的基因表达的宿主细胞主要有以下要求:①容易获得较高浓度的细胞。②能利用易得廉价原料。③不致病、不产生内毒。④发热量低、需氧低、适当的发酵温度和细胞形态。⑤容易进行代谢调控。椒霜疫霉菌株
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