DNA甲基化是一种表观遗传修饰,它是由DNA甲基转移酶(DNA methyl-transferase, DNMT)催化S-腺苷甲硫氨酸(S-adenosylmethionine, SAM)作为甲基供体,将胞嘧啶转变为5-甲基胞嘧啶(mC)的一种反应,在真核生物DNA中,5-甲基胞嘧啶是存在的化学性修饰碱基。CG二核苷酸是**主要的甲基化位点,它在基因组中呈不均匀分布,存在高甲基化、低甲基化和非甲基化的区域,在哺乳动物中mC约占C总量的2-7%。甲基化检测服务-亚硫酸氢钠处理后测序法 (bisulfite genomic sequencing PCR, BSP)是利用未甲基化的胞嘧啶可以被亚硫酸氢钠发生脱氨基变为尿嘧啶的原理,用两一特异性引物扩增后测序。测序法克服了只能针对单个位点检测,并且这些位点必须是限制性内切酶识别位点的缺点,可以对任何基因序列的甲基化状态进行检测。基因甲基化几乎发生在CpG岛(70%启动子)会损害转录因子结合,发生在基因区间能抑制有害元件的表达。北京亚硫酸盐甲基化重测序公司
亚硫酸氢钠修饰后测序法是一种对DNA进行亚硫酸氢钠处理、聚合酶链反应扩增与DNA测序相结合的方法,能够提供测定区域的序列信息,准确定位甲基化胞嘧啶位点;重亚硫酸盐修饰后,甲基化胞嘧啶保持不变,但非甲基化胞嘧啶转变为尿嘧啶,PCR扩增后为胸腺嘧啶,其将甲基化状态的差异转化成碱基的差异,从而对胞嘧啶的甲基化状态进行分析;但在亚硫酸钠处理的酸性环境下,单链特异性PCR模板稳定性下降,容易降解;并且模板链CG二核苷酸水平高易形成复杂的二级结构,常出现非特异性条带,结合“巢式PCR法”能明显提高扩增的特异度。安徽CPG岛甲基化重测序哪个公司做DNA甲基化是研究**为普遍的表观遗传修饰,它被认为在许多生物学过程和疾病中有着重要的作用。
物种的DNA甲基化率通常与物种基因组大小成正比。从细菌的数千个基因进化到高等动物的数万个基因,基因数增长的一个数量级。要管好这么多的基因,在漫长的一生中有规律地关闭或打开基因表达,DNA甲基化这个开关对高等动植物必不可少。转座子是一类在基因组上可以自主复制(或剪切)和移动的**功能元件。如果它们随意移动,对基因组的稳定性具有破坏作用。DNA甲基化对转座子的移动具有抑制作用。通常,物种的基因组越大,其基因组中转座子的比例越高,那么限制转座子移动的门神——DNA甲基化的比例就越高。
DNA甲基化是表观遗传学领域研究的重点之一。DNA甲基化是指在DNA甲基转移酶(DNA methyltransferase, 缩写DNMT)的作用下,基因组DNA序列上CpG岛的二核苷酸5′端胞嘧啶转变为5′甲基胞嘧啶(5′ methylcytosine, 缩写5mC)。这种DNA修饰的方式并未改变基因的序列, 但能改变某些基因的表达,从而影响生物学功能。DNA 甲基化参与众多的细胞生命活动,包括细胞分化、组织特异性基因表达、基因组印记、X 染色体失活等。异常的 DNA 甲基化会导致发育异常、tumour等疾病的发生。重亚硫酸盐扩增子测序法基于非甲基化胞嘧啶(C)向尿嘧啶(U)的化学转化,即用重亚硫酸盐处理基因组DNA。
DNA去甲基化分为两类:主动去甲基化(Active DNA Demethylation)和被动去甲基化(Passive DNA Demethylation)。基因组甲基化模式的形成主要依赖于主动去甲基化,主要涉及一类具有DNA去甲基化功能的蛋白,可能存在的五种机制a. DNA转葡糖基酶参与的碱基切除修复(base excision repair;BER):5-mC 由DNA 转葡糖基酶直接去除。此途径主要存在于植物体内,动物体内也可能存在。b.脱氨酶参与的碱基切除修复:5-mC 脱氨变成胸腺嘧啶T,形成G/T 错配,进入BER 途径。这一途径主要存在于动物体中,植物体中也可能存在。c.核苷酸外切修复机制(nucleotide excision repair;NER):直接移除甲基化的CpG 二核苷酸。d.氧化去甲基化:发生氧化反应打开碳-碳键,直接去除甲基基团。e.水解去甲基化:水解胞嘧啶的甲基基团,使其以甲醇的形式被释放。DNA被动去甲基化是指当DNMTs活性被抑制或浓度过低时,无法维持原有的甲基化状态,使DNA甲基化程度降低的过程,这类去甲基化通常发生在细胞复制的两个周期之间,涉及到某些可与DNMTs结合的因子,其结合后形成的复合物可以阻止DNMTs与DNA的结合。DNA甲基化是指针对DNA序列上的CpG岛,由甲基化转移酶将S腺苷甲硫氨酸的甲基转移给胞嘧啶。目标区域甲基化重测序哪里好
DNA复制后胞嘧啶的甲基化会改变DNA的构象,使DNA的大沟无法与DNA结合蛋白正常结合。北京亚硫酸盐甲基化重测序公司
全基因组重亚硫酸盐甲基化测序(WGBS)可以在全基因组范围内精确的检测所有单个胞嘧啶碱基(C碱基)的甲基化水平,是DNA甲基化研究的金标准。WGBS能为基因组DNA甲基化修饰的研究提供重要技术支持,能广泛应用在个体发育、衰老和cancer发生等生命过程的机制研究中。其原理是用 Bisulfite 处理DNA序列,首先将基因组中未发生甲基化的 C 碱基转换成U(T),从而与原本具有甲基化修饰的碱基C区分开来,然后进行PCR扩增,结合高通量测序技术,适用于全基因组范围内绘制单碱基分辨率的DNA 甲基化图谱。北京亚硫酸盐甲基化重测序公司
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