对 PCR 产 物进行限制性片段长度多态性分析(RFLP),即使用特异的限 制性核酸内切酶作用在扩增的核糖体不同序列位置产生不同 长度的片段,经过凝胶电泳后将大小不同的片段分开,...
1.1实时定量PCR的简写建议实时定量PCR(quantitativereal-timePCR)应当简写为qPCR,反转录PCR(reversetranscription–qPCR)应当简写为RT-q...
Bio-Rad 的 qPCR 设备全系标配 8 个温度梯度功能,只要运行一次实验,就能找到较合适的退火温度条件。专门的蜂巢式反应模块,保证了很好的温度均一性,即使在较快的升降温过程中同样如此。优化温度...
什么是CT值比较法?数据怎么处理?CT值与起始DNA浓度的对数成反比:如果:不同管之间的PCR反应效率相同。这些PCR的反应效率接近100%。可以从上面的公式推出相对含量(X01/X02)=2-ΔCT...
怎样判断定量pcr仪的样本加热块是否被污染?怎样清理污染?一个办法是运行背景校正反应板,当一个或多个反应孔连续显示出不正常的高信号,则表明该孔可能被荧光污染物。另外一种办法是在不放任何物品到样本块上的...
qPCR是不是会做不好呢?即使是看了人家文献里的PCR方法,照搬了人家的引物,还是做得每次结果都不一样?其实具体原因有这么几个。首先,你基本上不太会用移液头。移液头特别是微量移液头,特别长期快速操作,...
试验结果:(1)比较低检测限:40个循环和45个循环的比较低检测限均为3copies/μL;(2)低浓度模板的阳性检出率:2,1,0.5copies/μL的阳性检出率完全相同,分别为90%,70%,6...
相对来说比较难解决的,就是抑制物,在反转录过程中或者PCR过程中都可能有抑制物,这些抑制物,比如Na离子,EDTA,SDS,酚,血红素,腐植酸等等,都会对qPCR结果产生影响。具体体现在扩增曲线里会是...
定量PCR基因表达的实验数据应该如何处理?总的来说,有三个层次的校正是必须要做的。参比信号校正。试剂中必须包含固定浓度的ROX,这样由于反应总体积的差异、所在孔的位置不同、试管壁的厚度差异、管盖透光性...
传统的微生物鉴定方法,主要通过将微生物培养后依据形态学、生理生化反应、生态学特征等进行鉴别。 Orji 等指出这种方法只能检测出约 1%的重要病原菌,而利用宏基因组学、高通量测序、系统发育树分析等...
能否通过增加扩增循环数来增加试剂盒的敏感性?这里指的是大部分的qPCR试剂盒的循环数为40个或45个,我们能否在不改变试剂盒的设计的前提下,只通过将40个循环增加到45个循环,或是将临界值由38提高到...
Ct 会受到阈值的影响,每次试验由于样品和仪器的不同会导致基线不同,进而影响阈值和 Ct 值。模板的Ct值与该模板的起始拷贝数的对数存在一定线性关系,起始模板量浓度越高,Ct值越小;起始模板量浓度越低...