Ct 会受到阈值的影响，每次试验由于样品和仪器的不同会导致基线不同，进而影响阈值和 Ct 值。模板的Ct值与该模板的起始拷贝数的对数存在一定线性关系，起始模板量浓度越高，Ct值越小；起始模板量浓度越低...

提取样本中的RNA定量分析很重要，因为比较不样本时，使用大致相似相同数量的RNA是明智的。平常使用的有几种量化方法，如分光光度法(NanoDrop;ThermoScientific)，微流控分析法(A...

实时荧光定量 PCR双标准曲线即靶基因以及内参基因 各对应的一套标准曲线。假设靶基因的平均扩增效率为 E3， 在待测样品以及校准样品中的初始拷贝数分别为 N3 与 N4，当达到某一阈值...

每个量化目标的校准曲线必须包含在提交稿件中，这些信息审稿人可以看到。校准曲线的斜率和Y截距必须包含在发表中。不同PCR效率可以产生不同的校准曲线和不同的斜率。因此靶基因和参考基因的Cq值不同可以保持不...

双杂交探针也是 TaqM an 探针的衍 生形式,是由 Roche 公司开发的一种 PCR 定量技术 (LightCy cler(r)实时荧光定量 PCR 系统)。该技术 的特点是将荧光基团和淬灭基团...

扩增子是发生PCR反应的靶标基因片段。由于qPCR只是用于表征靶标基因的数量，并不需要得到其全长序列，因此扩增子区段的选择具有相当的灵活性，在基因读码框的内部即可（mRNA的分析除外）。区段的选择一般...

除了RT-qPCR实验上面所提到的非反转录控制外，所有qPCR反应还需要更多的控制和/或量化标准。在SYBRGreenI反应中应当用探针区别预期PCR产物中区别不可预知的扩增产物(如引物二聚体)时，应...

其实没有一项生物学实验是 so easy 的，即便是看起来毫无难度的 qPCR 。但同样地，任何一项生物学实验都是有套路的，包括 qPCR ，就看你套路深不深。对于像病毒载量这样的定量实验来讲，标准曲...

Ct值能否作为评价qPCR试剂盒的指标？qPCR试剂的评价需要从分析敏感性（比较低检测限），分析特异性的（交叉反应），重复性（精密度），诊断敏感性，诊断特异性等多个指标去衡量（诊断试剂评价系列2-核酸...

与传统的 PCR 技 术相比，Real-time Q-PCR 的不足之处是：①由于运用 了封闭的检测，减少了扩增后电泳的检测步骤，因此也 就不能监测扩增产物的大小。②因为荧光素种...

想做好qPCR，show出漂亮的结果，纠正不良的qPCR操作习惯，需要准备以下内容（以染料掺入法为例子）。1.设计目的基因引物。请参考以上内容，上海英俊默认是2OD，实际上2OD~5OD的...

实时荧光定量 PCR 技术可用于检测特异性突变基因，因为扩增 DNA 的 核苷酸序列不需要分子克隆和宿主细胞内的生长准 备，即可在媒介生物分子纯化过程中直接测得。利用 实时荧光定量 P...