支原体去除后对细胞检测的影响主要取决于去除方法和去除后的处理。以下是一些可能的影响: 1. 去除方法的影响:不同的支原体去除方法可能对细胞检测产生不同的影响。例如,一些去除方法可能会对细胞的代谢和增殖产生暂时性的影响,这可能会影响某些类型的细胞检测。 2. 去除后的处理:去除支原体后,细胞可能需要一段时间来恢复其正常的生理...
查看详细 >>免疫沉淀技术(Immunoprecipitation, IP)是一种用于研究蛋白质相互作用和纯化特定蛋白质的实验方法。 优点: 1. 特异性强:利用特异性抗体捕获目标蛋白,可以有效地从复杂的生物样本中分离出感兴趣的蛋白质。 2. 灵敏度高:可以检测到低丰度的蛋白质,包括瞬态或弱相互作用的蛋白质复合物。 3. 应...
查看详细 >>支原体去除后对细胞检测的影响主要取决于去除方法和去除后的处理。以下是一些可能的影响: 1. 去除方法的影响:不同的支原体去除方法可能对细胞检测产生不同的影响。例如,一些去除方法可能会对细胞的代谢和增殖产生暂时性的影响,这可能会影响某些类型的细胞检测。 2. 去除后的处理:去除支原体后,细胞可能需要一段时间来恢复其正常的生理...
查看详细 >>免疫沉淀纯化所得抗原量低有多种原因, A. 纯化所得抗原量低 1. 抗原结合水平低 IP 应用中出现低抗原结合水平的可能原因有很多,结合反应所使用的溶液是重要原因之一。必须使用适合的缓冲液,有特定的pH和盐浓度,可能还需要添加互作所需的辅助因子。IP 或Co-IP 中用于纯化的抗体是影响得率的另一个重要因素。如果抗体...
查看详细 >>免疫沉淀是利用抗体特异性反应纯化富集目的蛋白的一种方法。抗体与细胞裂解液或表达上清中相应的蛋白结合后,再与蛋白A/G(ProteinA/G)或二抗偶联的珠子(agarose或Sepharose)孵育,通过离心得到珠子-蛋白A/G或二抗-抗体-目的蛋白复合物,沉淀经过洗涤后,重悬于电泳上样缓冲液,煮沸5-10min,在高温及还原剂的作用下,...
查看详细 >>支原体是一类细菌,由于缺乏细胞壁,具有灵活的膜结构。这使得支原体的形态多变,很难在高倍显微镜下识别。并且能够抵抗压力、温度、渗透压和脱水,对许多针对细胞壁合成的常见抗*素具有抗性。它们的体积非常小,直径通常在0.15~0.3μm,因此能够轻易地穿过过滤系统。支原体能在哺乳动物细胞培养中可以高浓度生长,而不引起明显的混浊或其他可见的污染...
查看详细 >>免疫沉淀实验不同于WB实验的样品制备,对实验样品制备要求更高,除了要控制所有操作尽量在冰上完成外,关键的是裂解液的成分,裂解液成分直接决定了样品质量。 主要影响: 1. 蛋白的释放:许多目的蛋白定位在细胞器,质膜,细胞核,细胞骨架中,但通常这些亚细胞结构很难被裂解液有效溶解,所以很难将这些蛋白释放出来。 2. 蛋白相...
查看详细 >>免疫沉淀技术RIP(RNA Immunoprecipitation,RNA免疫沉淀)是一种用于研究细胞内RNA与蛋白质相互作用的技术。RIP技术可以帮助我们了解转录后调控网络的动态过程,并发现miRNA等非编码RNA的调节靶点。 RIP技术的原理是利用针对特定RNA结合蛋白的抗体,将细胞内的RNA-蛋白质复合物沉淀下来。然后,可...
查看详细 >>ChIP(染色质免疫沉淀)实验是一种用于研究蛋白质与DNA相互作用的技术。以下是ChIP实验的实验方法概述: 1. 交联:将细胞与交联剂(如1%甲醛)孵育,通常在室温下进行10-15分钟。 2. 终止交联:添加甘氨酸以终止交联反应,孵育5分钟。 3. 收集细胞:通过离心收集细胞,并用PBS洗涤以去除交联剂。 4...
查看详细 >>ChIP(染色质免疫沉淀)实验是一种用于研究蛋白质与DNA相互作用的技术。以下是ChIP实验的实验方法概述: 1. 交联:将细胞与交联剂(如1%甲醛)孵育,通常在室温下进行10-15分钟。 2. 终止交联:添加甘氨酸以终止交联反应,孵育5分钟。 3. 收集细胞:通过离心收集细胞,并用PBS洗涤以去除交联剂。 4...
查看详细 >>免疫沉淀技术(Immunoprecipitation, IP)的实验设计通常包括以下几个关键步骤: 1. 目标蛋白质的选择: 2. 抗体的选择:选择特异性强、亲和力高的抗体来捕获目标蛋白质 3. 样本的准备:收集和准备细胞或组织样本。 4. 蛋白质的裂解和释放:选择合适的裂解条件,如pH值、离子强度、...
查看详细 >>RIP技术的优势在于: 1. 特异性:利用特异性抗体,可以精确地捕获目标RNA结合蛋白及其相互作用的RNA。 2. 应用场景多:适用于研究RNA结合蛋白、miRNA、lncRNA等非编码RNA与蛋白质的相互作用。 3. 技术结合:RIP后的RNA可以用于多种下游分析,如qPCR、测序等,为研究RNA的功能和调控提供了...
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