免疫沉淀是利用抗体特异性反应纯化富集目的蛋白的一种方法。抗体与细胞裂解液或表达上清中相应的蛋白结合后,再与蛋白A/G(ProteinA/G)或二抗偶联的珠子(agarose或Sepharose)孵育,通过离心得到珠子-蛋白A/G或二抗-抗体-目的蛋白复合物,沉淀经过洗涤后,重悬于电泳上样缓冲液,煮沸5-10min,在高温及还原剂的作用下,...
查看详细 >>免疫沉淀技术RIP(RNA Immunoprecipitation,RNA免疫沉淀)的实验方法基于以下几个关键步骤: 1. 细胞裂解:首先,细胞或组织样本被裂解,以释放细胞内的蛋白质和RNA复合物。 2.抗体特异性结合:裂解后的样本中加入针对特定RNA结合蛋白的抗体。这些抗体能够特异性地识别并结合到目标蛋白。 3. ...
查看详细 >>免疫沉淀技术(Immunoprecipitation,简称IP)是一种生物化学方法,它利用特异性抗体对抗原进行亲和纯化。在含有目的抗原的细胞裂解液中加入特定的抗体以及Protein A/G-Beads(预先将Protein A/G固定结合在磁珠上),根据抗原与抗体、Protein A/G与抗体的Fc的特异性,形成“抗原-抗体-Prot...
查看详细 >>免疫沉淀(immunoprecipitation)是指利用抗体可与抗原特异性结合的特性,将抗原(常为靶蛋白)从混合体系沉淀下来,初步分离靶蛋白的一种方法。免疫共沉淀(coimmunoprecipitation)是一种在体外探测两个蛋白分子间是否存在特异性相互作用的一种方法。其原理非常简单,如果两个蛋白在体外体系能够发生特异性相...
查看详细 >>免疫沉淀实验不同于WB实验的样品制备,对实验样品制备要求更高,除了要控制所有操作尽量在冰上完成外,关键的是裂解液的成分,裂解液成分直接决定了样品质量。 主要影响: 1. 蛋白的释放:许多目的蛋白定位在细胞器,质膜,细胞核,细胞骨架中,但通常这些亚细胞结构很难被裂解液有效溶解,所以很难将这些蛋白释放出来。 2. 蛋白相...
查看详细 >>免疫沉淀技术(Immunoprecipitation, IP)是一种用于研究蛋白质相互作用和蛋白质特性的重要方法。它具有一些明显的优点,但也存在一些局限性。 优点: 1. 特异性强:IP技术利用特异性抗体对目标蛋白进行捕获,因此具有很高的特异性。 2. 富集低丰度蛋白:可以从小量样本中富集低丰度的目标蛋白,有助于研究...
查看详细 >>免疫沉淀是利用抗体特异性反应纯化富集目的蛋白的一种方法。抗体与细胞裂解液或表达上清中相应的蛋白结合后,再与蛋白A/G(ProteinA/G)或二抗偶联的珠子(agarose或Sepharose)孵育,通过离心得到珠子-蛋白A/G或二抗-抗体-目的蛋白复合物,沉淀经过洗涤后,重悬于电泳上样缓冲液,煮沸5-10min,在高温及还原剂的作用下,...
查看详细 >>免疫沉淀ChIP实验中磁珠还是琼脂糖珠的选择取决于客户实验情况。 琼脂糖珠海绵状的结构 (直径 50-150 μm) 可以结合抗体 (继而结合靶蛋白) ,它能够直接高效、快速结合抗体,而不需借助特殊的专业设备。琼脂糖珠呈多孔结构,这使得它们拥有更大的表面积可与蛋白质相互接触,具有更高的结合载量。 与琼脂糖珠不同,磁珠...
查看详细 >>免疫沉淀技术的实验方法通常包括以下步骤: 1. 样本准备 2. 细胞裂解:使用裂解缓冲液(含有蛋白酶抑制剂以防止蛋白质降解)裂解细胞,释放蛋白质。 3. 蛋白质浓度测定:使用BCA、Bradford或Lowry等方法测定裂解液中蛋白质的浓度。 4. 抗体预处理:如果使用预固定的抗体,需先将抗体固定在固相支持物上...
查看详细 >>免疫沉淀(immunoprecipitation)是指利用抗体可与抗原特异性结合的特性,将抗原(常为靶蛋白)从混合体系沉淀下来,初步分离靶蛋白的一种方法。免疫共沉淀(coimmunoprecipitation)是一种在体外探测两个蛋白分子间是否存在特异性相互作用的一种方法。其原理非常简单,如果两个蛋白在体外体系能够发生特异性相...
查看详细 >>RIP技术的优势在于: 1. 特异性:利用特异性抗体,可以精确地捕获目标RNA结合蛋白及其相互作用的RNA。 2. 应用场景多:适用于研究RNA结合蛋白、miRNA、lncRNA等非编码RNA与蛋白质的相互作用。 3. 技术结合:RIP后的RNA可以用于多种下游分析,如qPCR、测序等,为研究RNA的功能和调控提供了...
查看详细 >>ChIP(染色质免疫沉淀)实验是一种用于研究蛋白质与DNA相互作用的技术。以下是ChIP实验的实验方法概述: 1. 交联:将细胞与交联剂(如1%甲醛)孵育,通常在室温下进行10-15分钟。 2. 终止交联:添加甘氨酸以终止交联反应,孵育5分钟。 3. 收集细胞:通过离心收集细胞,并用PBS洗涤以去除交联剂。 4...
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