DNA甲基化是研究 为普遍的表观遗传修饰，它被认为在许多生物学过程和疾病中有着重要的作用。随着测序技术的快速发展，二代测序与重亚硫酸盐处理基因组DNA相结合产生了可以在全基因组单碱基水平上测量DNA甲基化水平的全基因组重亚硫酸盐测序（whole-genome bisulfite sequencing，WGBS）技术。WGBS的流程与全基因组DNA测序主要区别于DNA文库的构建。以MethlyC-seq为例，将DNA 段化后收集特定长度的片段并修复DNA末端，再将双端加上3′-dAMP然后连接上甲基化的接头，接着用重亚硫酸盐处理DNA使未甲基化的胞嘧啶（C）转化为尿嘧啶（U）， 终进行低循环数的PCR扩增后完成建库，建库完后上机测序，得到原始数据（fastq文件）后，完成一定的质量控制后就可以进行mapping分析。表观遗传学研究已经证实了特定基因区域的DNA甲基化修饰对于染色体构象、基因表达调控机制有着重要影响。河南目标区段甲基化重测序报告
DNA甲基化即在DNA上增加甲基基团，是使基因的转录抑制或沉默的主要方式。该修饰特异性地发生在CpG位点，胞嘧啶通过磷酸盐与鸟苷酸连接(图1)。甲基基团的插入改变了DNA的表观和结构，可能会直接阻碍DNA的识别及与转录因子的结合，或者吸引其他因子优先与DNA结合，干扰转录因子的结合。目前已鉴定了三个与甲基化DNA结合的蛋白家族，包括MBD蛋白、Kaiso和Kaiso样蛋白、以及SRA蛋白。通过招募这些蛋白，DNA甲基化可促进某些组蛋白状态的维持，如去乙酰作用，从而保持转录后的组蛋白修饰。例如，MBD家族的甲基CpG结合蛋白2(MeCP2)与甲基CpG结合，招募HDACs，可促使染色体浓缩和转录抑制。上海bisulfite甲基化重测序机构DNA甲基化是指针对DNA序列上的CpG岛，由甲基化转移酶将S腺苷甲硫氨酸的甲基转移给胞嘧啶。
亚硫酸氢钠修饰后测序法是一种对DNA进行亚硫酸氢钠处理、聚合酶链反应扩增与DNA测序相结合的方法，能够提供测定区域的序列信息，准确定位甲基化胞嘧啶位点；重亚硫酸盐修饰后，甲基化胞嘧啶保持不变，但非甲基化胞嘧啶转变为尿嘧啶，PCR扩增后为胸腺嘧啶，其将甲基化状态的差异转化成碱基的差异，从而对胞嘧啶的甲基化状态进行分析；但在亚硫酸钠处理的酸性环境下，单链特异性PCR模板稳定性下降，容易降解；并且模板链CG二核苷酸水平高易形成复杂的二级结构，常出现非特异性条带，结合“巢式PCR法”能明显提高扩增的特异度。
上海翼和生物甲基化测序采用的是重亚硫酸盐扩增子测序法（Bisulfite Amplicon Sequencing， BSAS），重亚硫酸盐转化是研究DNA甲基化的金标方法，该技术基于非甲基化胞嘧啶（C）向尿嘧啶（U）的化学转化，即用重亚硫酸盐处理基因组DNA，非甲基化胞嘧啶被转化为尿嘧啶，而甲基化胞嘧啶不发生这种转化，从而能够在单核苷酸水平上确定DNA甲基化（图1）。转化后的序列可以进行多种分析，包括重亚硫酸盐测序、焦磷酸测序、甲基化特异性PCR、高分辨率熔解曲线分析、基于微阵列的方法和下一代测序。DNA甲基化的位置主要集中在基因5′端的非编码区，DNA高度甲基化首先会影响DNA结构,引起基因沉默。
DNA甲基化主要形成5－甲基胞嘧啶（5-mC）和少量的N6-甲基嘌呤（N6-mA）及7－甲基鸟嘌呤（7-mG）结构基因含有很多CpG 结构, 2CpG 和2GPC 中两个胞嘧啶的5 位碳原子通常被甲基化, 且两个甲基集团在DNA 双链大沟中呈特定三维结构。基因组中60%～ 90% 的CpG 都被甲基化, 未甲基化的CpG 成簇地组成CpG 岛,位于结构基因启动子的core序列和转录起始点。有实验证明超甲基化阻遏转录的进行。DNA 甲基化可引起基因组中相应区域染色质结构变化, 使DNA 失去核酶?限制性内切酶的切割位点, 以及DNA 酶的敏感位点, 使染色质高度螺旋化, 凝缩成团, 失去转录活性。5 位C 甲基化的胞嘧啶脱氨基生成胸腺嘧啶, 由此可能导致基因置换突变, 发生碱基错配: T2G, 如果在细胞分裂过程中不被纠正,就会诱发遗传病或cancer, 而且, 生物体甲基化的方式是稳定的, 可遗传的。将序列与未经处理的序列进行比较，判断CpG位点是否发生甲基化。bisulfite甲基化重测序技术服务
DNA甲基化是DNA化学修饰的一种形式，能够在不改变DNA序列的前提下，改变遗传表现。河南目标区段甲基化重测序报告
DNA甲基化（DNA methylation）为DNA化学修饰的一种形式，能够在不改变DNA序列的前提下，改变遗传表现。所谓DNA甲基化是指在DNA甲基化转移酶的作用下，在基因组CpG二核苷酸的胞嘧啶5号碳位共价键结合一个甲基基团。大量研究表明，DNA甲基化能引起染结构、DNA构象、DNA稳定性及DNA与蛋白质相互作用方式的改变，从而控制基因表达。WGBS是基于重亚硫酸盐的甲基化分析方法，首先通过Bisulfite对样本DNA进行处理，将未甲基化的C碱基转化为U碱基，而甲基化的C碱基则不会改变，进行PCA扩增后U碱基会变成T，与原本甲基化的C碱基区分开，再结合高通量测序技术，可绘制单碱基分辨率的全基因组DNA甲基化图谱。河南目标区段甲基化重测序报告
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